13-顺式维甲酸体外诱导3种神经母细胞瘤细胞株分化研究

摘要

目的探讨13-顺式维甲酸（13-cisRA）体外对3种人神经母细胞瘤（NB）细胞株生长的影响及其作用机制。方法常规培养SH-SY5Y、SK-N-SH和SK-N-BE2细胞株，荧光原位杂交技术（FISH）检测3种细胞MYCN基因扩增情况。不同浓度13-cisRA作用后，采用相差显微镜观察细胞形态变化，酶联免疫吸附法测定细胞培养液神经元特异性烯醇化酶（NSE），细胞增殖毒性检测法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果13-cisRA作用后，3种细胞均伸出多个轴突树突状突起，呈极性化改变，出现细胞分化。FISH检测结果显示，SK-N-BE2细胞为MYCN扩增阳性，13-cisRA作用后MYCN仍扩增阳性，另2种细胞株未见扩增。3种细胞经不同浓度13．cisRA作用后NSE水平随药物作用时间延长而升高，其中SK-N-BE2细胞NSE水平显著升高，差异均有统计学意义（F=27．00，P〈0．0001）。13-cisRA作用48h内均促进细胞增殖，随后转为抑制细胞生长。SH-SY5Y细胞经10μmol／L13-cisfLA作用96h及120h显著增加细胞凋亡（F=16．21，P=0．011；F：16．04，P=0．016）；SK-N-SH细胞经1μmol／L及10μmol／L13-cisRA作用48h，细胞惆亡均显著增加（F=15．05，P=0．012；F=31．18，P=0．005）；SK-N-BE2细胞经不同浓度13-cisRA（1μmol／L、5μmol／L、10μmol／L）作用120h细胞啊亡均显著增加（F=9．05，P=0．030；F=11．38，P=0．028；F=7．88，P=0．041）。结论13-cisRA体外能显著诱导NB细胞分化，作用48h内促进细胞增殖，随后表现为抑制细胞生长，促进细胞凋亡。13-cisRA对MYCN扩增阳性的细胞在DNA检测水平无改善，提示可能需要联合用药。