低氧诱导因子-1α信号活化在川崎病患儿Th17／调节性T淋巴细胞失衡中的作用

摘要

目的探讨低氧诱导因子-1α（HIF-1α）信号活化在川崎病（KD）患儿Thl7／调节性T淋巴细胞（Treg）失衡机制中的作用。方法急性期KD患儿36例，健康对照组32例。KD患儿分别于IVIG治疗前、后直接取血备检。采用流式细胞术检测Thl7细胞、Treg比例及叉头蛋白P3（Foxp3）、IL-10、IL-17A、HIF-1理、磷酸化信号转导和转录活化因子3（pSTAT3）蛋白表达水平；实时荧光定量PCR检测CD4＋T淋巴细胞Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、受体相互作用蛋白1（RIP1）、IL-17A、RAR相关孤儿受体1t（RORγt）、p300mRNA表达；免疫共沉淀一定量PCR及免疫印迹法检测外周血CD4细胞IL-17A基因组蛋白H3乙酰化、Foxp3蛋白泛素化水平；ELISA检测血浆中IL．1B、IL-6、IL．21、IL-23、TNF-α水平。结果1．急性期KD患儿Th17细胞比例及IL-17A表达显著上升（t=7．62、9．60，P均〈0．05），Treg细胞比例及转录因子Foxp3、IL-10表达明显降低（t=5．72、6．82、5．83，P均〈0．05），Th17／Treg细胞比值远高于健康对照组（t=12．21，P〈0．05），经静脉用丙种球蛋白（IVIG）治疗后均有明显恢复（t=6．28、8．30、4．75、5．02、3．95、9．39，P均〈0．05）。2．急性期KD患儿CD4＋T细胞IL．17A基因组蛋白H3乙酰化水平及Foxp3蛋白泛素化水平显著上升[H3：（7．32±2．53）％比（2．60±1．08）％；Foxp3：（42．94±15．91）％比（11．01±3．60）％，t=10．20、11．71，P〈0．05]，HIF-1α、RO脚t及p300表达亦明显高于健康对照组（t=6．02、6．92、6．01，P均〈0．05），经IVIG治疗后均显著降低[H3：（4．63±2．07）％比（7．32±2．07）％；Foxp3：（26．37±11．58）％比（42．94±15．91）％；t=4．94、5．05、3．40、5．31、4．29，P均〈0．05]。其中，HIF-1理表达与IL-17A基因组蛋白H3乙酰化水平、Foxp3蛋白泛素化水平呈正相关（r=0．65、0．52，P均〈0．05）。3．急性期KD患儿血浆炎性细胞因子IL-1B、IL-6、IL-21、IL-23、TNF-α水平及TLR4表达显著增高（t=11．00、15．18、7．21、11．09、9．09、3．84，P均〈0．05），其下游信号分子MyD88、pSTAT3、RIP1表达亦明显高于健康对照组（t=10．07、5．41、8．13，P均〈0．05），经IVIG治疗后均显著降低（t=7．81、10．59、4．70、6．73、6．49、3．03、6．50、3．63、5．22，P均〈0．05）。结论HIF-1d信号异常活化可能是导致急性期KD患儿Th17／Treg细胞失衡的重要因素之一。