心脏α肌动蛋白1基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡的影响

摘要

目的探讨心脏α肌动蛋白1（ACTC1）基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡的影响。方法培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2；在大鼠胚胎心肌细胞H9C2中转染ACTC1-小干扰RNA（siRNA），分别于转染后24 h、48 h、72 h收集细胞，提取纯化RNA，采用实时荧光定量PCR法（qPCR）检测ACTC1基因表达水平；采用脱氧核苷酸原位末端标记法检测转染ACTC1-siRNA后ACTC1基因表达下调对大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡的影响；应用Western blot法分析凋亡相关基因蛋白细胞色素C（Cyto-C）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3、Caspase-8、Caspase-9及Bax/Bcl-2的表达。结果qPCR检测转染ACTC1-siRNA后24 h、48 h、72 h ACTC1 mRNA表达水平，与转染阴性对照siRNA组比较，ACTC1基因的mRNA表达水平均有下调趋势（0.80比1.00、0.20比1.00、0.25比1.00），转染后48 h、72 h组下降明显，48 h组最显著，差异有统计学意义（t＝4.245，P〈0.05）；与转染阴性对照siRNA组凋亡率（20%）比较，转染ACTC1-siRNA组凋亡率（80%）显著增加，差异有统计学意义（P〈0.05）；转染ACTC1-siRNA组Caspase-3、Caspase-9、Cyto-C及Bax/Bcl-2表达增高，与转染阴性对照siRNA组比较（0.91±0.12比0.59±0.01，0.48±0.09比0.24±0.03，0.92±0.03比0.45±0.01，2.25±0.26比1.16±0.12），差异均有统计学意义（t＝2.821、7.336、2.420、0.798，均P〈0.05）；2组Caspase-8表达水平比较，差异无统计学意义（P〉0.05）。结论ACTC1基因表达下调可能主要通过内源性线粒体信号转导途径，诱导大鼠胚胎心肌细胞H9C2细胞凋亡。