Avermectin C5-O-甲基转移酶基因的克隆、序列分析及其基因置换

摘要

C5-O-甲基转移酶基因(aveD)位于阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)染色体3.4kb BamHI的片段上,通过构建avermectin基因组约3.4kb BamHI片段的亚基因文库,用PCR的方法获得该基因的连锁基因C5-酮基还原酶基因(aveF),并作为探针筛出aveD的克隆子.测序后和GenBank做同源比较,结果一致.构建基因置换穿梭载体pHJ5803(pHZ1358::aveD & Amr),通过ET12567::pUZ8002属间接合转移导入S.avermitilis.放松培养后筛选出双交换重组菌株,并用PCR验证重组菌株的aveD已经破坏,将重组菌株摇瓶发酵液提取avermectin进行色谱质谱联机分析,发现重组菌株仅产生4个组分,与出发菌株的4个B组分完全一致.