单增李斯特菌双元调控系统hssS/hssR缺失株的构建及其生物学特性

摘要

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种重要的食源性人畜共患病原菌,可抵抗外界多种不利因素的影响,如酸、碱、渗透压和氧化应激。双元调控系统(two-component system,TCS)是细菌适应环境的重要调控系统,为了探明双元调控系统HssS/HssR对单增李斯特菌抗应激能力及毒力的影响,本研究以单增李斯特菌10403S为亲本株,利用同源重组技术构建了hssS/hssR基因缺失株,并对其部分生物学特性进行了研究。生长曲线结果显示,在氧化应激(20 mmol·L^(-1) H_(2)O_(2))条件下,缺失株ΔhssS/hssR的生长能力减弱;应激存活试验结果显示,在20 mmol·L^(-1) H_(2)O_(2)条件下应激处理1 h后,缺失株ΔhssS/hssR的生长率显著低于亲本株(P<0.01);小鼠巨噬细胞内吞及增殖试验结果显示,hssS/hssR基因缺失显著增强单增李斯特菌抗巨噬细胞吞噬的能力(P<0.01)并显著增强其在巨噬细胞内的增殖能力(P<0.05);鸡胚毒力试验结果显示,亲本株的LD50为102.2,缺失株的LD50为101.4,且缺失株对鸡胚肝的定殖能力显著高于亲本株(P<0.01),表明hssS/hssR基因缺失能显著增强单增李斯特菌的毒力。综上表明,双元调控系统HssS/HssR介导单增李斯特菌抗氧化应激作用与毒力。