牛胚胎性别鉴定荧光定量PCR方法的优化与应用

摘要

旨在建立一种可检测牛早期胚胎性别的复合探针体系,减少常规PCR方法电泳所带来的污染,提高鉴定准确率,降低鉴定成本.本研究以SRY为牛胚胎性别鉴定的目标基因,以进口YCD-PCR性别鉴定试剂盒为对照组(n=9543),荧光定量PCR的单引物分别扩增体系(荧光单扩,FSPSA,n=6570)和双引物混合扩增体系(荧光双扩,FDPM A,n=22238)分别做试验组,从性别鉴定效率、无反应率、雌雄胚胎百分率和比值、移植妊娠率、雌性胚胎母犊率、不同细胞取样数下的性别鉴定结果和鉴定成本等方面进行各组间比较.结果表明,荧光单扩组的雌性胚胎百分率和性别鉴定效率极显著高于其他两组(P<0.01),无反应率极显著低于其他两组(P<0.01),雌雄胚胎比值与其他两组差异较大(1.03:1 vs 1:1.03和1:1.02),雌性胚胎母犊率极显著低于荧光双扩组和对照组(P<0.01);荧光双扩组的雌性胚胎百分率、雄性胚胎百分率和雌性胚胎母犊率均与对照组无显著差异(P>0.05),雌雄胚胎比值与对照组相似(1:1.03和1:1.02),无反应率极显著低于对照组(P<0.01),性别鉴定效率极显著高于对照组(P<0.01).取样细胞4～6组和7～10组的性别鉴定效率极显著高于1～3组和SD(separated&died cells)组(P<0.01),而1～3组和SD组之间及4～6组和7～10组之间差异不显著(P>0.05).移植妊娠率4～6细胞组最高(49.68％),但各取样组间无显著差异(P>0.05).荧光双扩法与对照组相比,鉴定成本下降了46.76％.结果显示,荧光双扩方法产母犊准确率最高,鉴定成本较低,取样4～6细胞时的移植妊娠率最高,是一种更可行的牛胚胎性别鉴定技术,更有利于产业化推广和应用.