猪瘟病毒NS3丝氨酸蛋白酶功能区基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

摘要

用RT-PCR方法扩增分别获得了中国猪瘟病毒强毒石门株和兔化弱毒株非结构蛋白NS3丝氨酸蛋白酶功能区[即NS3(ΔC)]基因cDNA,将之克隆到pGEM T载体测定其核苷酸序列,并推导出其对应氨基酸序列,结果表明这两个毒株间的NS3(Δ C)区基因核苷酸序列同源性为95.8%,氨基酸序列同源性为99%,有2个残基的差异;两毒株与一些猪瘟病毒以及同属的牛病毒性腹泻病病毒代表毒株的对应序列进行比较,所测核苷酸序列及推导的氨基酸序列均极为保守,而且氨基酸序列分析结果还表明,瘟病毒NS3(Δ C)序列也含有与其它黄病毒同样保守的由His,Asp和Ser残基构成的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶催化三分体,三分体中Ser为丝氨酸蛋白酶催化活性关键氨基酸残基;将上述NS3(ΔC)基因亚克隆至原核表达载体pET-28a中,并在E.coli中获得高效表达,将表达产物纯化并免疫小鼠,间接免疫荧光和Western blot结果表明制备了针对NS3(ΔC)蛋白的多克隆抗体.上述实验结果为继续深入研究非结构蛋白NS3在猪瘟病毒的复制及病毒与宿主细胞相互关系中的作用,提供了基础材料及参考数据.