基于RNA复制子GHRH基因表达载体的构建及在293细胞中的表达

摘要

本研究将GHRH基因克隆到塞姆利基森林病毒(SFV)复制子质粒型表达载体pCMV-Rep-lacZ,构建了真核表达载体pCMV-Rep-GHRH.采用脂质体介导将表达质粒pCMV-Rep-GHRH转染293细胞,经RT-PCR、IFA、Tricine-SDS-PAGE和Western Blot检测,证明表达质粒pCMV-Rep-GHRH在293细胞中正确地表达了GHRH多肽分子.本研究还利用放免法检测质粒载体转染细胞培养上清中GHRH浓度,初步比较了RNA复制子载体pCMV-Rep-GHRH和普通载体(pIRES-GHRH和pcDNA3-GHRH)的表达效率,结果表明,转染48 h,RNA复制子载体表达GHRH的含量显著高于普通载体,分别比plRES-GHRH和pcDNA3-GHRH高出36.12%(P＜0.05)和67.94%(P＜0.05).结论:构建的真核表达载体pCMV-Rep-GHRH能够在真核细胞293中表达GHRH多肽分子,且表达水平显著高于普通载体,为下一步更好地调控动物生长以提高动物生产性能奠定基础.