猪附红细胞体的体外连续培养

摘要

临床疑似猪附红细胞体病猪红细胞,经Giernsa染色镜检及PCR扩增,证实感染猪附红细胞体(M.suis).PCR扩增片段(781 bp)与M.suis已知序列(AJ504999)同源性达99.4%.经预试验对红细胞接种量、血清添加量、pH等条件优化后,选用添加新生牛血清、酵母浸出液、葡萄糖等成分的PPLO肉汤,将染虫红细胞接种到细胞培养板上,置于37℃、含5%CO2的培养箱培养,定期更换培养液,约72 h后红细胞溶血变为带虫血影(Ghost).除首次接种外不添加任何红细胞,连续培养达280 d以上,染虫率维持近100%.对培养的带虫血影进行了光镜及扫描电镜观察、PCR鉴定、感染阴性红细胞试验、抗生素敏感性试验,证实与接种物为同一病原,并保持有感染阴性红细胞的能力.