牛白血病病毒env(gp51)基因的克隆和原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

摘要

从持续感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎肾细胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp.将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43 000,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性.以纯化的重组蛋白gp51作为抗原,建立检测BLV抗体的间接ELISA诊断方法.结果表明,抗原gp51的最佳包被浓度为2.19μg·mL-1,血清的最佳稀释倍数为1:80,阳性判定标准确定为样品OD450nm大于0.451.用该方法对12份参考血清进行检测,准确率为91.67%.