雌激素对鸡胚BMSCs诱导的成骨细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

摘要

本试验建立鸡胚骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外培养及其诱导成骨细胞方法,以探讨雌激素对BMSC诱导的成骨细胞的影响.以全骨髓进行体外贴壁培养、传代,取第3代细胞进行成骨细胞诱导培养,用倒置显微镜观察其形态,MTT法测定细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞周期率.通过碱性磷酸酶、Van Gieson及茜素红染色等方法进行成骨细胞鉴定.将诱导的成骨细胞分为5个试验组,分别添加10-7、10-8、10-9、10-10和10-11mol·L-1浓度的17β-E2于成骨细胞诱导培养基,并设置对照组.用MTT法和PNPP法测定不同浓度17β-E2对诱导成骨细胞增殖和分化的影响,判断其最有效浓度.并用该有效浓度作用于诱导培养的成骨细胞,通过流式细胞术观察该浓度17β-E.对诱导的成骨细胞凋亡的影响.结果表明,鸡胚全骨髓贴壁培养法可获得BMSCs,经典培养基诱导培养获得的细胞具有成骨细胞典型的生物学特征,其ALP、Ⅰ型胶原及钙化结节染色均为强阳性.10-9 mol·L-1 17 β-E2可促进诱导的成骨细胞增殖、分化,抑制其凋亡.经纯化处理的鸡BMSCs可诱导成骨细胞,且雌激素可提高BMSCs诱导的成骨细胞功能.