猪新基因FAM134B的克隆及稳定干扰肌内前体脂肪细胞阳性克隆的筛选

摘要

本实验旨在对猪新基因FAM134B基因进行全长克隆,尝试有效沉默FAM134B基因的干扰表达裁体的枸建和筛选,并筛选出沉默FA M134B基因的稳定阳性细胞.设计合成3对FAM134B基因的特异性发夹siRNA干扰片段,将其克隆入干扰载体pYr-1.1,构建可沉默FAM134B基因的siRNA表达载体FAM134B-1、FAM134B-2和FAM134B-3,采用LipofectamineTM (Lip) 2000介导质粒转染肌内前体脂肪细胞,通过实时荧光定量分析siRNA表达载体的干扰效果,并进一步用G418进行了稳定转染siRNA的肌内前体脂肪细胞筛选.结果表明:FAM134B基因的全长克隆成功,其siRNA表达载体构建正确,通过稳定筛选后,干扰效率较高的FAM134B-3表达载体和稳定转染FA M134B-3的细胞为构建筛选成功的siRNA表达载体和阳性细胞,干扰效率达65.0％.本研究成功克隆了新基因FAM134B的全长以及构建了有效沉默FA M134B基因表达的干扰载体,并筛选出了稳定沉默的阳性肌内前体脂肪细胞,为进一步研究FAM134B基因在脂肪沉积中的功能研究奠定了基础.