LC3蛋白敲除A549细胞系的构建及其对流感病毒复制的影响

摘要

微管相关蛋白1轻链3(LC3)是一种在流感病毒感染过程中被病毒M2蛋白招募至细胞膜处聚集的宿主细胞自噬相关蛋白。为了解其在流感病毒感染过程中行使的功能,利用CRISPR/Cas9技术构建LC3蛋白缺失细胞系,用以观察病毒生长复制的差异。设计sgRNA并插入至核心载体LentiCRISPRv2中,与辅助质粒共同转染293T细胞行慢病毒的包装。包装完成后用以感染A549细胞并进行嘌呤霉素压力筛选,对存活细胞的LC3蛋白含量进行检测,结果显示具有嘌呤抗性的细胞中未检测到LC3蛋白条带,LC3敲除细胞系构建成功。运用核染色法对比敲除细胞和正常细胞的细胞活性,发现缺失LC3蛋白细胞活性小幅度下降。流感病毒感染两种细胞绘制生长曲线,缺少LC3蛋白的条件下病毒复制水平下降。本研究构建的LC3蛋白缺失细胞系能够为将来研究LC3蛋白在细胞自噬与病毒感染过程中发挥功能,以及分子机制的研究提供了良好的细胞模型。