驽巴贝斯虫截短HSP70基因克隆、表达及其生物信息学分析

摘要

为了对驽巴贝虫(Babesia caballi)HSP70基因进行原核表达获得生物信息学数据。本试验以新疆地方驽巴贝斯虫株截短HSP70基因组DNA为模板进行PCR扩增,序列比对分析,构建重组表达质粒HSP70-pET32a,经过IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定。并用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体。经生物信息学分析,该蛋白属于碱性、稳定亲水性蛋白,有7个抗原位点。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白大小为33 kDa,以包涵体蛋白的形式高效表达;Western blot结果表明,表达产物可被自然感染的马驽巴贝斯虫阳性血清识别,具有良好的免疫原性。经检测多克隆抗体效价可达1∶1 024 000。本试验将为进一步探究驽巴贝斯虫HSP70蛋白作为抗驽巴贝斯虫疫苗和免疫学诊断方法的候选抗原及其功能研究提供了参考依据。