猪圆环病毒3型PCR检测方法的建立与Cap基因序列分析

摘要

建立一种检测PCV3流行毒株感染的PCR方法,并分析Cap基因序列变异情况,为PCV3流行病学调查提供技术支持。根据GenBank中公开的PCV3全基因序列,分别设计了质粒构建引物和检测引物,通过构建阳性质粒、灵敏度试验、特异性试验、临床样品检测试验以及测序分析,建立PCR检测方法。结果显示:建立的PCR方法检测的极限为50 copies/μL,以PRRSV、CSFV、PEDV、PRV、PPV、PCV-2的cDNA/DNA作为模板,用该方法扩增结果均为阴性,表明建立的方法特异性良好;应用该方法检测了285份样品,阳性39份,阳性率为13.7%。Cap基因序列分析显示,20株比对序列核苷酸同源性为87.1%~100%,SXSL1702与SXXA1812同源性为87.1%,在基因进化树中SXSL1702单独构成一个分支,提示SXSL1702株Cap基因与其他毒株有较大差异。成功建立了检测PCV3感染的PCR方法,为进一步流行病学调查和生物学特性研究奠定了基础。