犬博卡病毒结构蛋白VP1多克隆抗体的制备及特异性鉴定

摘要

为深入研究犬博卡病毒(MVC)结构蛋白VP1及其抗体在MVC感染及致病分子机制中的作用,本研究以先期构建的MVC感染性克隆载体pI-MVC为模板,构建VP1结构蛋白(独特区)原核表达载体pET32a(+)-VP1N,转化于大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达后进行蛋白可溶性分析;用镍柱亲和层析法纯化诱导表达产物,以纯化的VP1N融合蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,获得特异性抗VP1N多克隆抗体;通过ELISA的方法测定VP1N多克隆抗体效价,并采用Western blot和免疫荧光鉴定VP1N抗体的特异性.结果表明:重组蛋白VP1N可高效可溶性表达,分子量约为34 kDa;VP1N融合蛋白免疫兔后,ELISA法测定VP1N多抗效价达1:1600000;Western blot结果显示,VP1N多克隆抗体能够与MVC感染靶细胞后的天然VP1蛋白反应;细胞免疫荧光结果显示,该抗体也可与MVC感染WRD细胞中的天然VP1蛋白反应,且发现VP1大量分布于WRD细胞的胞核中.本研究所制备的VP1N抗体具有很好的反应性和特异性,为进一步深入研究VP1蛋白在博卡病毒致病性及感染机制中的研究提供实验基础.