猪谷氧还蛋白Ⅰ(GLRX1)基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

本研究针对猪GLRX1设计特异性引物,将PCR扩增片段分别连接至T-easy载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,10倍梯度稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中GLRX1标准曲线的构建,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验.结果显示标准曲线线性关系R2值均在0.99以上;特异性结果表明只能检测到猪GLRX1扩增曲线;组内和组间变异系数均小于5％.本研究初步建立了检测猪GLRX1基因的SYBR Green荧光定量RT-PCR的方法,为后续对猪传染性疾病与猪GLRX1之间相互关系的研究提供了一种特异、灵敏的检测方法.