新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与应用

摘要

为了建立一种敏感、特异、简单、快速的新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)抗体检测方法,本研究利用体外表达了NDRVσC蛋白,并以重组蛋白为包被抗原建立了检测NDRV抗体的间接ELISA方法。结果表明:RT-PCR扩增了大小为966 bp的σC基因片段,将目的片段连接至pET32a载体,经IPTG诱导获得了以包涵体形式表达的重组蛋白,Western blot检测显示该蛋白具有良好的反应活性,以重组蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测MDRV、NDV、DPV、DHAV-A、DHAV-C、DTMUV阳性血清均为阴性,检测NDRV阳性血清的最低抗体检出效价为1∶12800,批内和批间重复性试验的变异系数分别为3.30%~4.63%和4.86%~7.42%,检测1626份临床血清样品的阳性率为6.27%。说明获得了具有良好反应活性的重组σC蛋白,建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,为NDRV临床诊断、抗体监测和流行病学调查等提供了一种敏感、特异、简单、快速的血清学检测方法。