A型禽流感病毒H7N9株M1基因的克隆和真核表达

摘要

[目的]本实验旨在构建H7N9亚型禽流感病毒M1基因真核表达载体,并在293T细胞中表达其编码的蛋白.[方法]从苏州分离A/Environment/Suzhou/SZ19/2014(H7N9)毒株流感病毒的总RNA,然后进行RT-PCR扩增获得M1的全长基因,再将其分别克隆至真核表达载体pRK中构建pRK-Flag—M1真核重组表达载体,经酶切及测序鉴定正确后将质粒转染到293T细胞中,通过Western#Blot技术鉴定M1蛋白的表达.[结果]成功克隆了M1全长基因,构建了H7N9与M1蛋白真核表达载体pRK-Flag—M1,同时在293T细胞中转染表达,最后通过Western#blot确定了M1蛋白的成功表达.[结论]该表达载体的成功构建及在293T细胞中成功表达M1蛋白,为后期开展流感病毒蛋白功能及与真核细胞中的蛋白相互作用奠定基础.