褪黑素在电针减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤中的作用

摘要

目的评价褪黑素在电针减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤中的作用。方法清洁级健康雄性新西兰大白兔50只,体重2.0～2.5 kg,3月龄,采用随机数字表法分为5组（n=10）:假手术组（Sham组）、肢体缺血再灌注组（IR组）、电针刺激穴位组（EA组）、电针刺激非穴位组（SEA组）和电针刺激穴位+褪黑素受体拮抗剂Luzindole组（EA+L组）。采用夹闭股动脉3 h后再灌注4 h的方法制备兔肢体缺血再灌注损伤模型。EA组和EA+L组选取双侧足三里和肺俞穴（进针深度4～6 mm）,SEA组选取双侧足三里和肺俞穴旁开0.5 cm处（进针深度3 mm）,于模型制备前1～7 d及模型制备过程中给予电针刺激,刺激参数设置:频率2/15 Hz,刺激电流l～2 mA,疏密波,以兔出现轻微肌颤为宜,每次持续30 min,1次/d。EA+L组于模型制备前30 min时腹腔注射Luzindole 30 mg/kg。分别于缺血前即刻（T0）、缺血3 h（T1）和再灌注4 h（T2）时,收集右侧颈内静脉血样,采用ELISA法检测血清褪黑素浓度。再灌注4 h时,收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,采用ELISA法检测BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6浓度,采用黄嘌呤氧化酶法测定BALF中SOD活性,采用硫代巴比妥酸法测定BALF中MDA浓度。随后处死兔,取肺组织,测定湿重/干重（W/D）比值,光镜下观察病理学结果并进行肺损伤评分,透射电镜下观察超微结构,计算线粒体数量和线粒体相对横截面积。结果与Sham组比较,其余4组肺损伤评分和肺组织W/D比值升高,线粒体数量减少,线粒体相对横截面积增大,BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平升高,SOD活性降低,IR组T1和T2时血清褪黑素浓度降低,EA组和EA+L组T0时血清褪黑素浓度升高（P＆0.05）。与IR组比较,EA组肺损伤评分和肺组织W/D比值降低,线粒体数量增加,线粒体相对横截面积减小,BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平降低,SOD活性升高,EA组和EA+L组各时点血清褪黑素浓度升高（P＆0.05）,SEA组上述各指标差异无统计学意义（P＆0.05）。与EA组比较,SEA组和EA+L组肺损伤评分和肺组织W/D比值升高,线粒体数量减少,线粒体相对横截面积增大,BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA水平升高,SOD活性降低,SEA组各时点血清褪黑素浓度降低（P＆0.05）。结论电针可通过提高血清褪黑素水平减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤。