瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏与脊髓背角TMEM16C和Slack通道的关系

摘要

目的 评价瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏与脊髓背角Anotamins家族成员膜蛋白16C（TMEM16C）和Slack通道的关系。方法 雄性SD大鼠48只,1月龄。实验Ⅰ 取24只大鼠,采用随机数字表法分为4组（n＝6）：生理盐水组（S组）、病毒载体组（V组）、病毒载体＋瑞芬太尼＋切口痛组（VRI组）和AAV5-TMEM16C过表达＋瑞芬太尼＋切口痛组（ORI组）。经L4,5脊髓背角注射生理盐水（S组）、病毒载体（V组和VRI组）或AAV5-TMEM16C（ORI组） 1 μl,30 d时VRI组和ORI组尾静脉输注瑞芬太尼1 μg·kg-1·min-160 min,同时建立切口痛模型。于输注瑞芬太尼前24 h（T0）、输注停止后2、6、24和48 h （T1-4）时测定热缩足潜伏期（TWL）和机械缩足反应阈（MWT）。于行为学测定结束后,取脊髓背角L4,5节段,采用Western blot法测定总蛋白及膜蛋白TMEM16C和Slack的表达。实验Ⅱ 取24只大鼠,采用随机数字表法分为4组（n＝6）：生理盐水＋人工脑脊液（ACSF）组（SA组）、病毒载体＋ACSF（VA组）、病毒载体＋瑞芬太尼组（VR组）和AAV5-TMEM16C过表达＋瑞芬太尼组（OR组）。经L4,5脊髓背角注射生理盐水（SA组）、病毒载体（VA组和VR组）或AAV5-TMEM16C（OR组） 1 μl,30 d时取L4,5脊髓切片在ACSF（NSA组和VA组）或含有4 nmol/L瑞芬太尼的ACSF中（VR组和OR组）孵育60 min。各组孵育结束后应用全细胞膜片钳测定Slack通道电流的频率和振幅。结果 实验Ⅰ 与S组比较,VRI组T1-4时TWL缩短,MWT降低,脊髓背角总蛋白及膜蛋白TMEM16C和Slack表达下调（P＆0.05）；与VRI组比较,ORI组T1-4时TWL延长,MWT升高,脊髓背角总蛋白及膜蛋白TMEM16C和Slack表达上调（P＆0.05）。实验Ⅱ 与SA组比较,VR组脊髓背角Slack通道电流振幅和频率降低（P＆0.05）；与VR组比较,OR组Slack电流的振幅和频率升高（P＆0.05）。结论 瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏形成的机制与下调脊髓背角MEM16C表达,进而下调Slack通道表达有关。