猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠星形胶质细胞株的生物学特性

摘要

目的研究猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠星形胶质细胞株(IAST)的生物学特性,探讨其作为转基因细胞镇痛载体的可行性.方法取大鼠大脑皮层星形胶质细胞(AST)和IAST进行体外培养,观察细胞的形态学、超微结构以及传代复苏的情况;绘制细胞生长曲线,免疫细胞化学法检测细胞胶质纤维酸性蛋白的表达;5'溴-2-脱氧尿苷掺入法和流式细胞仪检测细胞增殖周期;双层软琼脂克隆形成实验和裸鼠接种实验检测细胞的致瘤性.结果AST体外传代至10代左右即出现复制衰老现象,而IAST可连续传代,未出现衰老迹象;细胞生长呈单层,锚着依赖和接触抑制;传代、冻存和复苏对IAST的存活率无影响,而第6代和第10代AST的存活率降低(P＜0.01);与第6代和第10代AST相比,IAST增殖较为旺盛,增殖指数较高,群体倍增时间较短、增殖率较高(P＜0.01);IAST胶质纤维酸性蛋白免疫染色阳性,软琼脂培养无集落形成,裸鼠接种无致瘤性.结论大鼠IAST是增殖活跃的非恶性转化细胞,可安全地用于转基因细胞移植镇痛研究.