N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基基因重组腺病毒镇痛疫苗的构建

摘要

目的构建携带N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）基因的重组腺病毒镇痛疫苗。方法以携带NR2B基因的腺病毒穿梭质粒pDC515-NR2B和腺病毒骨架质粒pBHGfrt（del）E1,3FLP共转染腺病毒包装细胞293细胞,连续观察细胞的形态学。取形成病毒空斑的293细胞,分别采用PCR、RT-PCR及Western blotting的方法从基因水平、转录水平和蛋白水平对病毒空斑筛选和鉴定,对鉴定正确的病毒空斑进行扩增和纯化。结果转染后12d可观察到细胞病变效应,15d后形成病毒空斑。NR2B基因不仅正确插入重组腺病毒载体,而且可在293细胞正确表达NR2B蛋白。鉴定正确的病毒空斑命名为NR2B基因重组腺病毒5型镇痛疫苗,滴度为5×1011VP/ml,纯度100%。结论成功地构建了NR2B基因重组腺病毒镇痛疫苗,可用于疫苗镇痛的研究。