Nrf2-ARE信号通路在乳化异氟醚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

摘要

目的评价转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）-抗氧化反应元件（ARE）信号通路在乳化异氟醚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法原代培养16~20周龄SD大鼠心肌细胞,以10~4/cm~2的细胞密度平铺于层粘连蛋白预处理过的6孔板中孵育20 h。采用随机数字表法,将其分为3组（n=12）:对照组（C组）常规培养110 min;缺氧复氧组（A/R组）心肌细胞缺氧45 min,复氧60 min;乳化异氟醚后处理组（EI组）心肌细胞缺氧45 min时以1.68 mmol/1乳化异氟醚孵育5 min,随后复氧60 min。于复氧末电镜下观察心肌细胞超微结构,并进行线粒体功能评分。采用Real-Time PCR和Western blot法检测心肌细胞Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）、超氧化物歧化酶1（SOD1）、醌氧化还原酶1（NQO1）mRNA及其蛋白表达水平。采用荧光共聚焦显微镜观察Nrf2的核转位情况,记录心肌细胞核内Nrf2活性。结果与C组比较,A/R组和EI组心肌细胞线粒体损伤评分升高,心肌细胞Nrf2、HO-1、SOD1和NQO1 mRNA及其蛋白表达下调,心肌细胞核内Nrf2活性增强（P＜0.05）;与A/R组比较,EI组心肌细胞线粒体损伤程度评分降低,心肌细胞Nrf2、HO-1、SOD1和NOO1 mRNA及其蛋白表达上调,心肌细胞核内Nrf2活性增强（P＜0.05）。结论乳化异氟醚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的机制可能与诱导Nrf2核转位从而激活Nrf2-ARE信号通路有关。