mito-KATP在七氟醚后处理抑制氧糖剥夺-复糖复氧原代大鼠心肌细胞焦亡中的作用

摘要

目的评价线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)在七氟醚后处理抑制氧糖剥夺-复糖复氧原代大鼠心肌细胞焦亡中的作用。方法出生48 h内的SD大鼠,体外培养大鼠心室肌细胞并接种于6孔板（2 cm）培养皿或96孔板,采用随机数字表法分为6组（n=15）:对照组（C组）、氧糖剥夺-复糖复氧组（O组）、七氟醚后处理组（Sev组）、七氟醚后处理+5-羟葵酸组（SH组）、5-羟葵酸组（H组）和氧糖剥夺-复糖复氧+5-羟葵酸组（HO组）。心肌细胞氧糖剥夺4 h,复糖复氧24 h进行氧糖剥夺-复糖复氧;复糖复氧后将培养基在2%七氟醚环境下处理1h进行七氟醚后处理;氧糖剥夺前1h培养皿中加入mito-KATP阻断剂5-羟葵酸100μmol/L;C组心肌细胞正常培养。于复糖复氧24 h时收集心肌细胞,采用流式细胞学AlexaFour488（caspase-1 FLICA标记）和TMR red（DNA标记）双标记法确定心肌细胞焦亡率,采用MTT法确定细胞存活率,采用二氯荧光黄双乙酸盐法测定线粒体活性氧（ROS）含量,采用荧光探针JC-1法检测线粒体膜电位（MMP）,采用Western blot法测定IL-1β表达。结果与C组比较,O组心肌细胞焦亡率和ROS含量升高,存活率和MMP降低,IL-1β表达上调（P＜0.05）;与O组比较,Sev组心肌细胞焦亡率和ROS含量下降,存活率和MMP升高,IL-1β表达下调（P＜0.05）;与Sev组比较,SH组心肌细胞焦亡率和ROS含量升高,存活率和MMP降低,IL-1β表达上调（P＜0.05）;与SH组比较,HO组心肌细胞焦亡率和ROS含量升高,存活率和MMP降低,IL-1β表达上调（P＜0.05）。结论七氟醚后处理抑制氧糖剥夺-复糖复氧原代大鼠心肌细胞焦亡的机制可能与增加mito-KATP开放相关。