基于TGF-β1/Smad通路探讨A型肉毒毒素对增生性瘢痕的抑制作用及机制

摘要

目的:探讨A型肉毒毒素(BTXA)通过TGF-β_(1)/Smad通路对增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用及其机制。方法:体外培养增生性瘢痕成纤维细胞,采用0.2、0.4、0.8 U/ml的BTXA处理成纤维细胞,分别作为0.2 U/ml BTXA组、0.4 U/ml BTXA组、0.8 U/ml BTXA组,空白对照组不采用BTXA(0 U/ml)处理,0.8 U/ml BTXA+TGF-β_(1)组用0.8 U/ml BTXA和10 ng/ml的TGF-β_(1)激活剂处理。甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达。结果:与空白对照组比较,0.2、0.4、0.8 U/mlBTXA显著降低增生性瘢痕成纤维细胞活力和PCNA蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,0.2、0.4、0.8 U/ml的BTXA显著提高增生性瘢痕成纤维细胞凋亡率(P<0.05)。与空白对照组比较,0.2、0.4、0.8 U/ml的BTXA显著升高增生性瘢痕成纤维细胞G0/G1期(P<0.05);显著降低细胞S期、G2/M期和Cyclin D1蛋白表达(P<0.05)。与空白对照组比较,0.2、0.4、0.8 U/ml的BTXA显著降低p-Smad2/3蛋白表达(P<0.05)。与0.8 U/ml BTXA组比较,0.8 U/ml BTXA+TGF-β_(1)组显著升高增生性瘢痕成纤维细胞活力、S期、G2/M期和Cyclin D1、PCNA蛋白表达(P<0.05);显著降低细胞凋亡率和细胞G0/G1期(P<0.05)。结论:BTXA通过抑制TGF-β_(1)/Smad通路从而抑制增生性瘢痕成纤维细胞存活,为临床治疗提供了思路。