多房棘球蚴表面抗原EMY162的原核表达及抗体制备

摘要

目的建立多房棘球蚴表面抗原EMY162原核表达系统及制备兔多克隆抗体。方法构建表达载体pCznl-EMY162并转入ArcticExpress菌株，用IPTG诱导、Ni柱纯化获得目的蛋白后免疫新西兰兔，以ELISA、SDS-PAGE考察纯化后抗体的效价、浓度及纯度。结果酶切鉴定和测序结果表明重组质粒pCznl-EMY162构建成功，且EMY162在包涵体部位中表达、可溶部位微量表达。通过Ni-NTA柱亲和层析纯化获得高纯度的EMY162蛋白。免疫兔后收集血清，其ELISA结果表明，抗血清可以特异性结合目标蛋白，抗体效价大于512K，SDS—PAGE结果表明，纯化后获得了较高纯度的多克隆抗体，可用于后续实验研究。结论成功建立EMY162原核表达系统并制备了高纯度、高效价的多克隆抗体。