H19介导miR-let-7的分子机制及其在妊娠期糖尿病中的作用研究

摘要

背景妊娠期糖尿病作为临床中常见的妊娠期合并症,其严重威胁产妇及胎儿的生命健康.H19作为一种印记基因,进一步分析其为妊娠期糖尿病靶向治疗工作的开展提供依据.目的 研究H19介导miR-let-7的分子机制及其在妊娠期糖尿病中的作用.方法 2017年1月-2018年1月于北京大学医学部购进50只SPF级小鼠,根据小鼠的血糖以及血脂水平等将其分为正常组(n=20)和高脂组(n=30).采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术分析正常组和高脂组小鼠H19、let-7、靶基因脂蛋白脂肪酶(LPL)以及肝脏胰岛素受体β(INSR-β)和胰岛素通路相关因子2(IRS-2)、胰岛素受体(INSR)的相对mRNA表达水平.同时于小鼠成肌细胞株中,分别通过细胞转染技术转染干扰RNA(siRNA),特异性敲除小鼠H19,以及转染反义链抑制剂ilet-7,特异性阻断let-7结合靶基因,共转染后分别在第3、6周时收获细胞,观察不同时间点H19、let-7以及靶基因LPL、INSR-β、IRS-2和INSR的相对mRNA表达水平.在人卵巢畸胎瘤细胞系PA-1中,分别通过细胞转染技术转染siRNA,特异性敲除人H19,以及转染反义链抑制剂ilet-7,特异性阻断let-7结合靶基因,共转染后分别在第3、6周时收获细胞,观察各组中H19、let-7以及靶基因LPL、INSR-β、IRS-2及INSR的相对mRNA表达水平.结果 高脂组小鼠H19、let-7及LPL mRNA表达水平高于正常组,INSR-β、IRS-2及INSR mRNA表达水平低于正常组(P<0.05).不同时间点小鼠成肌细胞株H19、let-7、LPL、INSR-β、IRS-2及INSR mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05).不同时间点人卵巢畸胎瘤细胞系PA-1 H19、let-7、LPL、INSR-β、IRS-2及INSR mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 H19在miR-let-7中发挥分子介导机制,且在妊娠期糖尿病的参与中发挥至关重要的作用,临床中应当加强对妊娠期孕妇的H19以及miR-let-7等相关指标的检测,实现对妊娠期糖尿病的早期预测.