促红细胞生成素预防内皮细胞凋亡时对天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3亚家族的影响

摘要

目的 探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)在预防氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中对天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspases-3)亚家族的影响.方法 体外培养HUVECs,将细胞随机分组,分别加入caspase-3抑制剂DEVD-CHO、caspase-8抑制剂z-IETD-fmk、caspase-9抑制剂z-LEHD-fmk各25 μmol/L预孵育24 h后,再加入100 mg/L ox-LDL处理48 h.平行实验中,加入6.25、25.00、100.00 kU/L的rhEPO预处理HUVECs 24 h,再加入100 mg/L ox-LDL处理48 h.用比色法检测caspase-3、caspase-8、caspase-9活性;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测HUVECs活性;用流式细胞术检测caspase-3阳性表达率和HUVECs凋亡率.结果 caspase-3抑制剂、caspase-8抑制剂分别降低各自对应的caspase活性,caspase-9抑制剂可同时降低caspase-3、caspase-9活性(P均<0.05).加入rhEPO预处理后,ox-LDL诱导内皮细胞caspase-3、caspase-9活性及caspase-3阳性表达率降低,且呈剂量依赖性(P均<0.05),而caspase-8活性无明显变化,HUVECs的细胞凋亡率也呈剂量依赖性降低(P均<0.05).结论 rhEPO可呈剂量依赖性抑制ox-LDL诱导HUVECs 凋亡时caspase-3、caspase-9活性,提示ox-LDL诱导HUVECs 凋亡信号通路涉及caspase-3、caspase-9,而与caspase-8无关.