参附注射液对心肺复苏后心肌功能障碍猪转录因子T-bet和GATA-3表达的影响

摘要

目的：探讨参附注射液是否可以通过纠正调节性T细胞特异性转录因子GATA-3和T-bet的表达失衡来减轻心肺复苏（CPR）后心肌功能障碍。方法按照随机数字表法将30只实验猪分为假手术组（6只）和复苏组（24只），复苏组再分为生理盐水组、肾上腺素组、参附组3组，每组8只。采用心内膜电刺激法诱发心室纤颤（室颤）8 min后进行2 min的CPR，然后分别静脉推注20 mL参附注射液1.0 mL/kg（参附组）、肾上腺素0.02 mg/kg（肾上腺素组）或生理盐水（生理盐水组）。各组分别于室颤前及自主循环恢复（ROSC）后0.5、2、6 h取血，检测血流动力学及氧代谢指标；于ROSC后24 h处死存活动物取心肌，光镜和电镜下观察心肌病理改变，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素-4（IL-4）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和γ-干扰素（IFN-γ）水平，用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）和实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）分别检测转录因子GATA-3、 T-bet的蛋白及mRNA表达水平。结果3个复苏组均有6只动物恢复自主循环；肾上腺素组和参附组CPR时间、除颤次数、除颤能量均明显少于生理盐水组， ROSC时间明显提前。与假手术组比较，生理盐水组左心室收缩功能、氧代谢指标明显下降；心肌细胞和心肌纤维均发生进行性坏死，线粒体结构消失；心肌细胞IL-4明显下降，TNF-α、 IFN-γ、IFN-γ/ IL-4〔反映辅助性T细胞亚群1/2（Th1/Th2）〕均明显升高；GATA-3蛋白和mRNA表达明显下降，T-bet蛋白和mRNA表达明显升高。与生理盐水组比较，参附组心肌细胞超微结构损害轻微，ROSC 6 h心率（HR）明显下降（次/min：90.33±3.79比106.83±5.36），平均动脉压（MAP）、心排血量（CO）、氧输送（DO2）、氧消耗（VO2）均明显升高〔MAP（mmHg，1 mmHg＝0.133 kPa）：107.67±1.96比86.83±1.85， CO（L/min）：2.47±0.08比2.09±0.04，DO2（mL/min）：364.31±4.21比272.33±3.29，VO2（mL/min）：95.00±2.22比82.50±2.28，均P＜0.05〕；ROSC 24 h时，心肌细胞IL-4明显升高（ng/L：33.80±3.06比16.15±1.34，P＜0.05），TNF-α、IFN-γ、IFN-γ/IL-4明显降低〔TNF-α（ng/L）：18.16±0.71比29.64±1.89，IFN-γ（ng/L）：373.75±18.36比512.86±27.86，IFN-γ/IL-4：16.15±1.34比33.80±3.06，均P＜0.05〕，T-bet蛋白及mRNA表达明显降低〔T-bet蛋白（灰度值）：0.41±0.07比0.59±0.11， T-bet mRNA（2-ΔΔCt）：4.37±0.21比7.57±0.55，均P＜0.05〕，GATA-3蛋白及mRNA表达明显升高〔GATA-3蛋白（灰度值）：0.25±0.07比0.16±0.07，GATA-3 mRNA（2-ΔΔCt）：0.63±0.07比0.34±0.05，均P＜0.05〕。且参附组各指标改善程度亦明显优于肾上腺素组。结论 Th1/Th2失衡导致的心肌免疫功能障碍参与了室颤复苏后心肌损伤过程。参附注射液可以通过调节心肌细胞转录因子GATA-3和T-bet的表达失衡，从而减轻心肌细胞损伤，改善心肌细胞免疫功能失调，发挥其对复苏后心肌功能障碍的保护作用。