MCC950能减轻线粒体损伤相关分子模式对肺泡巨噬细胞的致炎效应

摘要

目的观察一种化学合成小分子物质MCC950对线粒体损伤相关分子模式（MTDs）诱导肺泡巨噬细胞炎症反应的影响,并分析其可能的机制。方法利用差速离心法提取SD大鼠肝脏组织来源的MTDs。体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞株,并分为空白对照组、LPS阳性对照组（1 mg/L LPS刺激12 h）、MTDs组（50、100、200 mg/L MTDs刺激12 h）、MCC950组（0.1μmol/L MCC950处理30 min）、MCC950+MTDs组（终浓度0.001、0.01、0.1、1.0μmol/L MCC950预处理30 min+100 mg/L MTDs刺激12 h）5组。收集各组细胞上清液及细胞,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β、IL-18）含量;采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1及其前体（caspase-1、pro-caspase-1）、IL-1β及其前体（pro-IL-1β）的蛋白表达。结果①与空白对照组相比,50、100、200 mg/L的MTDs刺激组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-18含量均显著升高[TNF-α（ng/L）:459.17±66.71、968.27±124.29、1 128.6±172.02比34.67±11.66,IL-1β（ng/L）:341.57±38.09、685.00±75.36、784.97±89.28比26.33±8.04,IL-18（ng/L）:175.87±37.43、364.23±39.24、370.60±44.55比73.77±12.10,均P＜0.05],且呈剂量依赖性;并与LPS组具有类似的致炎作用。②与MTDs组相比,0.01、0.1及1.0μmol/L MCC950+MTDs组细胞上清液中IL-1β、IL-18含量显著降低[IL-1β（ng/L）:334.23±33.56、38.67±12.89、36.13±17.69比724.00±77.45,IL-18（ng/L）:165.77±25.47、71.37±5.99、66.80±14.61比412.23±40.15均P＜0.05],其中0.1μmol/L为产生抗炎作用的最佳有效浓度。而各浓度MCC950对TNF-α影响不大。③与MTDs组相比,0.01μmol/L MCC950+MTDs组细胞中caspase-1及IL-1β蛋白表达显著下降（A值:14753.29±950.31比19222.50±1 234.13,9981.06±673.63比12759.26±574.69,均P＜0.05）,pro-caspase-1及pro-IL-1β蛋白表达无明显变化（A值:17856.08±1 076.20比17059.01±966.37,23020.19±3463.57比20642.36±1 714.36,均P＞0.05）。结论 MCC950能够减少MTDs诱导的肺泡巨噬细胞炎性因子分泌,可能通过抑制炎性体活化发挥作用。