人STAT3基因siRNA真核表达质粒的构建及鉴定

摘要

目的:构建针对人STAT3基因的siRNA真核表达质粒,检测其在细胞水平对STAT3基因表达的抑制效果.方法:用DNA重组技术将针对人STAT3基因mRNA序列不同位点设计的3个siRNA序列克隆到真核表达质粒pRNAT-U6.1eo中构建重组体pRNAT-U6.1-siRNA,重组质粒经PCR检测及测序分析,用脂质体转染重组质粒至人食管癌Eca-109细胞,G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR和Western blot检测STAT3基因mRNA和蛋白的表达,筛选最佳沉默效率的siRNA.结果:PCR检测及测序分析结果均提示重组质粒构建正确.RT-PCR和Western blot检测证实pRNAT-U6.1-siRNA3具有最佳的沉默效率.结论:成功构建人STAT3基因siRNA真核表达质粒,并证实其能够从mRNA和蛋白水平抑制STAT3基因的表达.