食管癌细胞

摘要： 《食管疾病》本期集中刊发省部共建食管癌防治国家重点实验室王立东教授和高社干教授团队食管癌和食管胃交界部腺癌系列临床和基础应用研究论文,对食管癌和食管胃交界部腺癌临床防治实践具有重要指导和借鉴意义。本专辑的第一个主题是食管癌预后相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)研究,报道的SNP位点所在的基因多数是近年发现的肿瘤相关重要基因,这些SNP的特点是能够调控或影响其他肿瘤相关基因的转录活性或蛋白表达,这可能是这些SNP影响食管癌细胞的侵袭或转移,进而影响患者生存的重要机制。

摘要： 目的探讨LncRNA XIST通过靶向miR-511-3p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养食管癌细胞Eca109,将细胞分组,分别为:si-NC组(转染si-NC)、si-XIST组(转染si-NC)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-511-3p组(转染miR-511-3p)、si-XIST+anti-miR-NC组(共转染si-XIST和anti-miR-NC)和si-XIST+anti-miR-511-3p组(共转染si-XIST和anti-miR-511-3p)。qRT-PCR检测XIST和miR-511-3p的表达;MTT检测细胞的增殖水平;Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测PCNA和MPP-2的蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证XIST和miR-511-3p的靶向关系。结果与正常食管黏膜上皮细胞相比,食管癌细胞中XIST表达明显增加,miR-511-3p表达明显降低(P<0.05);干扰XIST或过表达miR-511-3p可以明显抑制食管癌细胞Eca109增殖、迁移和侵袭。XIST可以靶向调控miR-511-3p的表达,抑制miR-511-3p可以逆转干扰XIST对食管癌细胞Eca109增殖、迁移和侵袭的作用。结论XIST可通过上调miR-511-3p抑制食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,旨在为食管癌提供新的作用靶点。

摘要： 以2-氯硒基苯甲酰氯为原料,合成了2-((2-氧代丙基)硒基)- N -(2,4,6-三甲基)苯甲酰胺( 3 ),其结构经 ^(1)H NMR、 ^(13)C NMR、 HR-MS(ESI)和XRD表征。结果表明: 3(CCDC: 1944721)属于单斜晶系, P2_(1)/c空间群,晶胞参数为 a =23.3910(4) A,b=8.30202(2) , c =9.21781(19) A,β =90.3953(18)°, V= 1789.98(7) A^(3),,Z =4, Dc =1.389 g/cm^(3) , F (000)=768.0, R_(gt )( F )=0.0404, wR_(ref) ( F^(2 ))=0.1172, S =1.035, μ =2.906 mm 1 。用MTT法测得3(100 μg/mL)对食管癌细胞(EC109)的体外增殖抑制率为21.31±1.04%。

摘要： 目的 探讨白头翁皂苷D调控腺苷酸活化蛋白激酶/环氧合酶-2(AMPK/COX-2)信号通路对人食管癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响。方法 体外培养EC9706细胞,不同浓度梯度白头翁皂苷D处理后,MTT法检测EC9706细胞增殖,以筛选白头翁皂苷D的作用浓度。将EC9706细胞分为对照组,白头翁皂苷D(PSD)低、中、高剂量组(10、20、40μmol/L白头翁皂苷D),PSD高剂量+AMPK抑制剂(Compound C)组(40μmol/L白头翁皂苷D+10μmol/L Compound C),平板克隆形成实验检测EC9706细胞增殖;流式细胞术检测EC9706细胞凋亡;Western blot法检测EC9706细胞Bax、Bcl-2、p53、磷酸化AMPK(p-AMPK)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)、COX-2蛋白表达水平。结果 与对照组比较,PSD低、中、高剂量组EC9706细胞克隆形成率、Bcl-2、COX-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax、p53、p-AMPKα、p-ACC蛋白表达水平显著升高,并呈浓度依赖性(P<0.05);与PSD高剂量组比较,PSD高剂量+Compound C组细胞克隆形成率、Bcl-2、COX-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、p53、p-AMPKα、p-ACC蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 白头翁皂苷D通过激活AMPK途径抑制COX-2表达,进而抑制EC9706细胞增殖,促进细胞凋亡。

摘要： 目的探讨LIM结构域2(LIMD2)对食管癌细胞增殖、凋亡的影响,及其对细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的调控作用。方法取10例食管癌患者癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测LIMD2 mRNA表达,采用免疫荧光染色检测LIMD2蛋白表达,采用Western blot法检测ERK1/2、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达。取人食管癌细胞(KYSE30、EC9706)和人正常食管上皮细胞(HEEC),采用qRT-PCR及免疫荧光染色检测细胞中LIMD2 mRNA及蛋白表达,筛选出LIMD2 mRNA及蛋白表达最高的EC9706细胞进行后续试验。取EC9706细胞,分为对照组(常规培养)、Si-LIMD2组(转染LIMD2干扰序列的腺病毒载体)、Si-NC组(转染不含LIMD2干扰序列的空腺病毒载体)、PD98059组(ERK/MAPK通路阻断剂)、ISO组(ERK/MAPK通路激活剂)、Si-LIMD2+ISO组(在Si-LIMD2组基础上加入ISO溶液);采用qRT-PCR及免疫荧光染色检测细胞中LIMD2 mRNA及蛋白表达;采用CCK-8法检测细胞增殖活性;采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;采用Western blot法检测细胞ERK1/2、p-ERK1/2、p38MAPK、p-p38MAPK、细胞周期相关蛋白cyclin D1和CDK2、caspase-3、整合素β1、黏着斑激酶(FAK)、整合素连接激酶(ILK)表达。结果LIMD2 mRNA及蛋白在食管癌组织及KYSE30细胞、EC9706细胞中的表达均较高,且在EC9706细胞中的表达高于KYSE30细胞,差异均有统计学意义(P<0.05);p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白在食管癌组织中表达较高(P<0.05)。与对照组相比,Si-LIMD2组和PD98059组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较低,增殖活性较低,G0/G1期比例较高,S期及G2/M期比例较低,凋亡率较高,cyclin D1、CDK2蛋白表达较低,caspase-3蛋白表达较高,差异均有统计学意义(P<0.05),ISO组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较高,增殖活性较高,G0/G1期比例较低,S期及G2/M期比例较高,凋亡率较低,cyclin D1、CDK2蛋白表达较高,caspase-3蛋白表达较低,差异均有统计学意义(P<0.05);与Si-LIMD2组相比,Si-LIMD2+ISO组FAK、ILK、整合素β1蛋白及p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达较高,增殖活性较高,G0/G1期比例较低,S期及G2/M期比例较高,凋亡率较低,cyclin D1、CDK2蛋白表达较高,caspase-3蛋白表达较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论沉默LIMD2基因表达可能通过抑制ERK/MAPK磷酸化途径激活而抑制食管癌细胞增殖、促进其凋亡。

摘要： 目的:探讨虫草素对食管癌细胞Eca-109的作用及其潜在的机制。方法:不同浓度(35、70、140、280μg/mL)虫草素分别处理Eca-109细胞24 h、48 h、72 h和96 h,CCK-8检测细胞活力,筛选虫草素最佳作用浓度(70μg/mL)和时间(24 h)。实验分为4组:对照组、虫草素组(70μg/mL虫草素)、SB203580组(10μg/mL SB203580)和虫草素+SB203580组(70μg/mL虫草素+10μg/mL SB203580)。培养24 h后,CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;qRT-PCR和Western blot分别检测细胞周期相关、凋亡相关和p38 MAPK信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组相比,虫草素组、SB203580组和虫草素+SB203580组细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),细胞发生G 2期阻滞,凋亡率显著升高(P<0.05),cyclinB1、CDK4、p-p38、ERK1和ERK2的表达下调(P<0.05),CKI和Caspase-3的表达上调(P<0.05)。结论:虫草素可抑制食管癌细胞Eca-109增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其作用机制与p38 MAPK信号通路有关。

摘要： 目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)ZNF667-AS1通过靶向miR-31-5p对食管癌细胞增殖和迁移的影响及潜在的机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测ZNF667-AS1在食管癌细胞Eca109、EC1、TE1和正常食管上皮细胞Het-1A的表达水平,并选择表达差异最大的细胞株进行后续实验.采用脂质体转染技术将pcDNA3.1-ZNF667-AS1过表达重组载体质粒转染至人食管癌Eca109细胞,实验分为对照组(未行转染的Eca109细胞)、pcDNA3.1组(转染空载体质粒的Eca109细胞)和ZNF667-AS1组(转染pcDNA3.1-ZNF667-AS1质粒的Eca109细胞),qPCR技术检测pcDNA3.1-ZNF667-AS1的转染效果,噻唑蓝比色法(MTT)和平板克隆实验检测过表达ZNF667-AS1对Eca109细胞增殖能力的影响,Transwell实验检测Eca109细胞迁移能力,流式细胞术检测Eca109细胞凋亡率,Western blot检测Eca109细胞中G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、细胞周期依赖性激酶抑制因子(p21)、上皮标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、间充质标志物神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关蛋白X(Bax)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达水平,生物信息学预测ZNF667-AS1与miR-31-5p的互补配对关系,荧光素酶报告实验和qPCR技术验证ZNF667-AS1和miR-31-5p的靶向调控关系.多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验.结果 与Het-1A细胞相比,食管癌Eca109、EC1和TE1细胞中ZNF667-AS1的表达水平均降低(1.00±0.08比0.29±0.04,0.36±0.05,0.33±0.06),差异有统计学意义(P0.05).生物信息学预测发现ZNF667-AS1和miR-31-5p存在靶向结合位点;荧光素酶报告实验结果显示,与空载转染组比较,miR-31-5p组ZNF667-AS1-Wt相对荧光素酶活性(1.00±0.10比0.19±0.02)降低(P0.05).结论 过表达ZNF667-AS1能抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移并诱导其凋亡,其机制可能与ZNF667-AS1靶向调控miR-31-5p有关.

摘要： 以2-氯硒基苯甲酰氯为原料,合成了2-((2-氧代丙基)硒基)-N-(4-乙基苯基)苯甲酰胺(3),其结构经1H NMR、13C NMR、HR-MS(ESI)和XRD表征.结果表明:3(CCDC:1944723)属单斜晶系,P21/c空间群,晶胞参数为a=18.0933(6)?,b=9.4337(2)?,c=9.8684(3)?,β=91.797(3)°,V=1683.57(8)?3,Z=4,Dc=1.421 g/cm3,F(000)=736.0,Rgt(F)=0.0422,wRref(F2)=0.1145,S=1.028,μ=3.068 mm1.用MTT法测得3(100μg/mL)对食管癌细胞(EC109)的体外增殖抑制率为14.94±0.60％.

摘要： [目的]探讨干扰素-λ(IFN-λ)联合化疗药物对人食管癌细胞(T.Tn细胞)增殖的影响,并探索其发挥作用的可能机制.[方法]应用MTT技术检测经IFN-λ处理后T.Tn细胞的增殖情况;根据干预措施5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、顺铂(cis-platinum,CDDP)的不同,分为未添加任何药物的T.Tn细胞组(对照组)、IFN-λ组、化疗药物组(T.Tn细胞+5-FU组或T.Tn细胞+CDDP组)、联用组(T.Tn细胞+IFN-λ+ 5-FU组或T.Tn细胞+IFN-λ+ CDDP组).应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组中T.Tn的细胞增殖活性,从而判断两者是否存在协同作用;应用Western blotting检测细胞系中Caspase-3、Caspase-8表达情况,探索IFN-λ可能的抗T.Tn细胞增殖的机制.[结果]IFN-λ能显著抑制T.Tn细胞增殖,IFN-λ联合化疗药物组的细胞增殖活性明显降低(P＜0.05).Western blotting结果显示,IFN-λ可诱导剪切形式的Caspase3、Caspase8蛋白增加.[结论]IFN-λ联用化疗药物(5-FU、CDDP)可协同抑制T.Tn细胞增殖,其作用机制可能与Caspase3、Caspase8蛋白相关.

摘要： 目的 间质干细胞分泌的外泌体(MSC-ex)是MSC旁分泌的活性成分,在多种疾病包括肿瘤的治疗中有着重要的应用.文章拟探讨人脐带间充质干细胞(MSC)外泌体携载miR-4465抑制食管癌细胞EC109侵袭、迁移的作用及机制.方法 分离、培养脐带MSCs并提取MSC-ex,透射电镜、纳米颗粒分析观察外泌体的结构,Western blot检测外泌体标志蛋白CD9和CD81表达.超声法将miRNA mimics NC及miR-4465 mimics导入MSC-ex,获得miRNA mimics NC修饰MSC-ex(NC miR-ex)及 miR-4465 mimics 修饰 MSC-ex(miR-4465-ex).PBS、MSC-ex、miR-4465-ex 分别与EC109共培养,采用激光共聚焦显微镜观察MSC-ex在细胞内分布,qRT-PCR检测EC109的miR-4465水平,Transwell和划痕实验观察miR-4465 mimics转染及miR-4465-ex作用后EC109的迁移及侵袭能力,免疫印迹法检测EC109的上皮-间质化相关蛋白的表达.结果 与NC miR-ex 组(1.00±0.09)比较,miR-4465-ex 25 nmol/L、miR-4465-ex50nmol/L 组EC109细胞中miR-4465表达水平(20.26±2.75、34.71±5.26)显著升高(P＜0.01),且具有剂量依赖性.与mimics NC组(84.67±4.60)相比,miR-4465 mimics25 nmol/L(23.67±4.14)转染组EC109细胞的迁移率明显降低(P＜0.01),且miR-4465 mimics50nM(10.27±1.32)转染组EC109细胞的迁移率更加明显(P＜0.01).与 NC miR-ex 组(82.35±4.52)比较,miR-4465-ex 组(23.12±2.22)EC109细胞的迁移率明显降低(P＜0.01),Western blot结果表明,与PBS和NC miR-ex组相比,miR-4465-ex作用后EC109细胞 N-Cadherin(P＜0.05)、p-Smad1/2(P＜0.01)和 Vim-entin(P＜0.01)表达下调,E-Cadherin表达上调(P＜0.01).结论 MSC-ex作为载体携载高水平miR-4465,可能通过下调TGFB/Smad1/2通路抑制食管癌细胞EC109的侵袭、迁移.

摘要： 目的：研究hsa-miR-21-3p对人食管癌细胞Eca9706侵袭和迁移能力的影响.方法：应用寡核苷酸hsa-miR-21-3p拟似物和阴性对照转染Eca9706细胞后,用实时荧光定量PCR检测转染后hsa-miR-21-3p的表达水平,通过Transwell体外侵袭实验和划痕愈合实验分别观察hsa-miR-21-3p对Eca9706细胞的侵袭和迁移能力的影响.结果：与对照组相比较,hsa-miR-21-3p mimics转染组细胞中hsa-miR-21-3p表达升高;Transwell体外侵袭实验表明hsa-miR-21-3p的过表达显著增强食管癌细胞的侵袭能力;划痕愈合实验结果显示,转染hsa-miR-21-3p mimics的细胞迁移能力比对照组增强.结论：hsa-miR-21-3p的高表达可以使人食管癌细胞Eca9706的侵袭能力和迁移能力增强,提示其可能参与了肿瘤的发展过程,发挥着癌基因样的作用,有可能成为食管癌早期诊断的标志物和分子治疗的新靶标.

摘要： 目的：肿瘤细胞耐药性的产生是化疗失败的重要原因.本课题研究自噬是否参与食管癌细胞对顺铂的耐药及其相关的机制.方法：(1)自噬的检测;(2)顺铂处理后细胞活力恢复的检测;(3)凋亡的检测;(4)细胞衰老的检测SA-b-gal染色;(5)目标基因的敲低siRNA干扰技术;(6)相关信号通路的检测WesternBlotting检测mTOR及其底物和MAPK(Erk,p38和JNK)的磷酸化。结果：顺铂诱导耐药食管癌细胞发生自噬，而没有诱导敏感细胞发生自噬。自噬抑制剂氯哇与顺铂合用后能进一步减弱耐药细胞的克隆存活，而对顺铂在敏感细胞的作用无影响。结论：顺铂通过抑制mTOR活性诱导耐药细胞发生自噬，作为促生存的机制而介导食管癌细胞对顺铂的耐药，而抑制自噬的发生能够增强顺铂的抗肿瘤作用。因此，自噬抑制剂与顺铂联合使用有可能为临床克服肿瘤耐药提供新的治疗方案。

摘要： 目的:探讨反义VEGFcDNA对放射线诱导人食管癌细胞VEGF高表达的抑制作用，为食管癌放疗与反义VEGF治疗提供依据。方法:阳离子脂质体作为载体，用反义VEGFcDNA质粒转染人食管癌细胞TE-1；MTT法、原位杂交和流式细胞术检测转染后癌细胞；γ线照射转染、非转染食管癌细胞TE-1，采用免疫组化、ELISA与RT-PCR法分别观察反义VEGFcDNA对放射线诱导的食管癌细胞TE-1VEGF表达的作用。结果:转染反义VEGFcDNA的食管癌细胞有外源性反义VEGFcDNA的整合及表达，癌细胞生长速率无明显减慢，凋亡现象并不明显，转染细胞较非转染的食管癌细胞TE-1相比，照射后细胞表达VEGFmRNA及蛋白的水平均明显降低。结论:放射线可以诱导食管癌细胞TE-1VEGF表达增多，反义VEGFcDNA对放射线诱导的人食管癌细胞VEGF高表达有明显抑制作用。

摘要： 目的：探讨启膈散及其拆方治疗食管癌的作用、组方原理和机理。rn 方法：观察启膈散及其活血和化痰两个拆方对原代培养的人食管癌细胞和食管癌细胞株Eca109细胞PLC-γ1 mRNA和蛋白表达的影响。rn 结果：人食管癌组织细胞PLC-γ1mRNA和蛋白高度表达；启膈散及其拆方可以不同程度地抑制这些细胞的生长，同时抑制原代培养肿瘤组织细胞和Eca109细胞株的PLC-γ1mRNA和蛋白表达，各组药物对PLC-γ1表达与对细胞生长作用效果模式相似，以活血组最好，全方组次之。rn 结论：食管癌细胞PLC-γ1生物合成增强，启膈散及其拆方通过抑制PLC-γ1生物合成，从而影响PLC-γ1介导的信号转导是其抑制食管癌细胞生长的部分机理。

摘要： 目的：为了寻找有效的化学预防药物应用于食管癌高发区，降低食管癌的发病率，提高生存质量，我们在香加皮抗瘤活性成分的提取过程中，分离得到黄酮类单体成分宝藿苷Ⅰ(Baohuoside-I)，通过分析宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞的作用，以期为将该药应用于临床治疗和预防食管癌提供实验依据。 方法：采用逐步分离法对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离与纯化，并使用柱层析和高效液相色谱法进行分离、纯化，应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定。并用MTT法观察不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用，流式细胞术分析宝藿苷Ⅰ对细胞的周期变化和对凋亡的影响：经皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型，通过肌注给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗食管癌作用。 结果：宝藿苷Ⅰ呈浓度及时间依赖性抑制Eca109细胞增殖(p<0.D5)，流式细胞仪结果显示Eca109细胞在宝藿苷Ⅰ作用后细胞阻滞于G1期，G2和S期细胞减少，凋亡细胞增加.25ug/ml宝藿苷Ⅰ作用24h时细胞凋亡率达48.3％±2.12％.宝藿苷Ⅰ(15mg，kg)经肌注入荷瘤裸鼠后，肿瘤生长明显受到抑制，与对照组比较，有显著性差异(p<0.05)，肿瘤生长抑制率达64.1％。 结论：香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞增殖具有显著的抑制作用，在体内也有较好的抗食管癌效果。其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期和诱导凋亡有关。

摘要： 以姜黄素处理人食管癌EC9706细胞,应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳与质谱鉴定技术研究细胞凋亡中核基质蛋白表达的差异。rn 结果,共鉴定出12个核基质蛋白点,其中8个表达上调或新出现的蛋白,4个表达下调的蛋白.表明了,诱导肿瘤细胞凋亡中发生着特异核基质蛋白的变化和对肿瘤细胞凋亡的调控作用,这对揭示核基质蛋白组成与细胞凋亡的关系有重要意义。

摘要： 目的:观察艾克清胶囊对人肺腺癌细胞(A549)、食管癌细胞(Eca9706)增殖的抑制作用.方法:采用A549细胞及Eca9706细胞为实验对象,用四氮唑(MTT)法检测二者的生存率,用公式计算细胞抑制率,在倒置显微镜下观察二者的细胞形态学改变.结果:1.艾克清胶囊能显著抑制A549细胞及Eca9706细胞的增殖,并且有显著的量效关系.2.在低剂量下,艾克清胶囊对A549细胞的增殖抑制与对照孔相比有一定的抑制作用,但无统计学意义,对其细胞的形态学有一定的影响;在低剂量下,Eca9706细胞增殖速度较快;3.高剂量下,艾克清胶囊能显著影响A549细胞的形态,有直接杀死此二种肿瘤细胞的作用.结论:1.艾克清胶囊对A549细胞及Eca9706细胞的增殖有明显的抑制作用.2.艾克清胶囊对二者的抑制机制可能是通过影响细胞的增殖周期或促进了细胞的死亡.

摘要： 目的：探讨尼妥珠单抗对食管癌ECA-109细胞放射敏感性的影响及可能机制,为其临床应用提供理论依据.rn 方法：体外培养人食管癌ECA-109细胞,分为空白组、照射组(4Gy)、药物组(900nM)、照射+药物(联合)组,细胞在照射24h前给予尼妥珠单抗进行处理,照射2h 后收集细胞.克隆形成实验检测尼妥珠单抗对人食管癌ECA-109细胞的放射增敏作用.流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.Western blotting检测EGFR、p-EGFR、DNA-PKcs、p-DNA-PKcs、γH2AX的表达变化.rn 结果：联合组Dq,D0及SF2明显低于照射组，放射增敏比为1.36。流式细胞术结果显示:联合组较照射组和药物组细胞凋亡率增加，差异有统计学意义。Western blotting结果显示，各组的EGFR和DNA-PKcs的蛋白表达无明显变化。p-EGFR,p-DNA-PKcs在照射组较空白组表达明显升高，而在药物组中明显降低，γH2AX在照射组及药物组均较空白组表达明显升高，差异均有统计学意义。与照射组和单药组比较，联合组p-EGFR和p-DNA-PKcs蛋白表达明显降低，而γH2AX蛋白表达明显升高。rn 结论：尼妥珠单抗可提高食管癌ECA-109细胞的放射敏感性，其机制可能与抑制EGFR磷酸化及DNA损伤修复有关。

摘要： 目的：探讨尼妥珠单抗对食管癌ECA-109细胞放射敏感性的影响及可能机制,为其临床应用提供理论依据.rn 方法：体外培养人食管癌ECA-109细胞,分为空白组、照射组(4Gy)、药物组(900nM)、照射+药物(联合)组,细胞在照射24h前给予尼妥珠单抗进行处理,照射2h 后收集细胞.克隆形成实验检测尼妥珠单抗对人食管癌ECA-109细胞的放射增敏作用.流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.Western blotting检测EGFR、p-EGFR、DNA-PKcs、p-DNA-PKcs、γH2AX的表达变化.rn 结果：联合组Dq,D0及SF2明显低于照射组，放射增敏比为1.36。流式细胞术结果显示:联合组较照射组和药物组细胞凋亡率增加，差异有统计学意义。Western blotting结果显示，各组的EGFR和DNA-PKcs的蛋白表达无明显变化。p-EGFR,p-DNA-PKcs在照射组较空白组表达明显升高，而在药物组中明显降低，γH2AX在照射组及药物组均较空白组表达明显升高，差异均有统计学意义。与照射组和单药组比较，联合组p-EGFR和p-DNA-PKcs蛋白表达明显降低，而γH2AX蛋白表达明显升高。rn 结论：尼妥珠单抗可提高食管癌ECA-109细胞的放射敏感性，其机制可能与抑制EGFR磷酸化及DNA损伤修复有关。

摘要： 目的：探讨尼妥珠单抗对食管癌ECA-109细胞放射敏感性的影响及可能机制,为其临床应用提供理论依据.rn 方法：体外培养人食管癌ECA-109细胞,分为空白组、照射组(4Gy)、药物组(900nM)、照射+药物(联合)组,细胞在照射24h前给予尼妥珠单抗进行处理,照射2h 后收集细胞.克隆形成实验检测尼妥珠单抗对人食管癌ECA-109细胞的放射增敏作用.流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.Western blotting检测EGFR、p-EGFR、DNA-PKcs、p-DNA-PKcs、γH2AX的表达变化.rn 结果：联合组Dq,D0及SF2明显低于照射组，放射增敏比为1.36。流式细胞术结果显示:联合组较照射组和药物组细胞凋亡率增加，差异有统计学意义。Western blotting结果显示，各组的EGFR和DNA-PKcs的蛋白表达无明显变化。p-EGFR,p-DNA-PKcs在照射组较空白组表达明显升高，而在药物组中明显降低，γH2AX在照射组及药物组均较空白组表达明显升高，差异均有统计学意义。与照射组和单药组比较，联合组p-EGFR和p-DNA-PKcs蛋白表达明显降低，而γH2AX蛋白表达明显升高。rn 结论：尼妥珠单抗可提高食管癌ECA-109细胞的放射敏感性，其机制可能与抑制EGFR磷酸化及DNA损伤修复有关。

摘要： 本发明涉及清热祛湿活血方及其拆方在制备抑制食管癌细胞药物中的应用，可有效解决制备抑制食管癌细胞EC9706、ECa109、EC‑1、TE‑1药物的问题。清热祛湿活血方是由绵萆薢9‑20g、白毛藤15‑30g、黑骨藤9‑24g、夏天无6‑15g制成，拆方为清热祛湿方和活血方，其中，清热祛湿方是由绵萆薢9‑20g和白毛藤15‑30g制成，活血方是由黑骨藤9‑24g、夏天无6‑15g制成，将清热祛湿活血方、清热祛湿方、活血方分别加入体积浓度为95%乙醇浸泡7天，乙醇加入量为各组方药物重量的5倍，每天早晚各摇动一次，真空抽滤，滤液58°C恒温干燥，分别得乙醇提取干燥物，‑20°C保存。本发明原料丰富，制备方法简单，易生产制备，开拓了清热祛湿活血方及其拆方的新用途，提高了药用价值和商业价值。

摘要： 本发明涉及金匮要略方葶苈大枣泻肺汤水提物在制备抑制食管癌细胞药物中的应用，可有效解决制备抑制食管癌EC9706、Eca109、EC‑1、TE‑1细胞的药物问题，葶苈大枣泻肺汤药物为葶苈子10g、大枣12枚，加药物重量15‑20的水浸泡1小时，电炉武火煮沸，文火煎煮1h，过滤，滤液浓缩，该浓缩液具有显著抑制食管癌EC9706、Eca109、EC‑1、TE‑1细胞的功效，有效用于制备抑制食管癌EC9706、Eca109、EC‑1、TE‑1细胞的药物。本发明原料丰富，制备方法简单，易生产制备，为研究抑制食管癌细胞迁移、增殖、浸润的方剂提供了理论和技术支持，治疗食管癌有实际的临床意义。

摘要： 本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，尤其涉及一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物及其应用。RNF31是一种E3泛素连接酶，本发明首次发现了RNF31基因表达与食管癌细胞系迁移能力相关，通过检测受试食管癌细胞系中RNF31的表达，可以判断受试食管癌细胞系迁移能力的强弱。本发明中的受试食管癌细胞是分别转染目的基因siRNA和不含目的基因siRNA，利用western blot和q‑PCR技术检测siRNA沉默效率。食管癌细胞系迁移的判断，是通过划痕和和transwell实验可准确反映细胞的迁移能力。根据对受试食管癌细胞系RNF31蛋白和mRNA含量的检测即可快速判断食管癌的迁移表型。

摘要： 本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，尤其涉及一种用于检测食管癌细胞迁移和侵袭能力的分子标志物及其应用。本发明运用RT‑PCR、q‑PCR、Western Blot、划痕实验和Transwell小室模型等现代分子生物学技术。成功构建了靶向RBCK1基因干扰siRNA，在细胞水平研究干扰RBCK1基因后对食管癌细胞迁移能力的影响，本发明提供的试剂盒，可用于检测食管癌迁移能力，具有很好的实用性。本发明首次发现了RBCK1基因表达与食管癌细胞系迁移能力有关，食管癌细胞迁移能力在一定程度上可反映食管癌患者发生转移的可能性大小，为食管癌的治疗提供了新的思路和新的方案。

摘要： 本发明公开了食管癌技术领域的一种PRR11在食管癌组织及食管癌细胞系中使用方法，该PRR11在食管癌组织及食管癌细胞系中使用方法包括如下步骤：PRR11在食管癌组织中的表达及意义；本发明通过分析食管鳞癌组织中PRR11的表达与性别、年龄等临床病理特征的相关性，对食管癌患者预后的预测，并通过选择PRR11mRNA表达水平较高的食管鳞癌EC109细胞系，采用慢病毒转染法构建PRR11稳定低表达的EC109细胞系，通过体外的细胞增殖活力实验、细胞侵袭实验等研究PRR11表达对食管鳞癌细胞生物学行为的影响，能够通过对PRR11的使用从而提高食管癌的诊断、治疗及预后的预测。

摘要： 本发明涉及抗食管癌细胞核仁抗原单抗及食管癌诊断试剂及其制备方法。在制备了抗食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体后,进一步做成食管癌诊断试剂盒。应用抗食管癌细胞核仁单克隆抗体,可用来检测人肿瘤细胞相关核仁抗原的存在,作为判断恶性肿瘤的标志;也可用来在肿瘤患者治疗前后,应用该抗体检测人恶性肿瘤相关核仁抗原阳性细胞比率的变化,对治疗效果及预测复发提供依据。食管癌诊断试剂同样能对恶性肿瘤治疗效果的评价提供敏感方法和指标,并可用来进行对恶性肿瘤的流行病学调查。其诊断结果准确,诊断时间早。

摘要： 本发明公开了一种实时无标记细胞分析仪在食管癌细胞增殖和迁移能力检测中的应用，1)增殖实验：将干预后的细胞消化，计数，接种至增殖检测板，增殖检测板中每孔接种若干个细胞，利用实时无标记细胞分析仪监测细胞增殖；2)迁移实验：将干预后的细胞消化，计数，接种至实时无标记细胞分析仪的细胞迁移检测板的上室，上室培养液含0‑5％胎牛血清，细胞迁移检测板中每孔接种若干个细胞，下室培养液含5％‑10％胎牛血清，监测由上室迁移至下室的细胞数量。本发明无需对食管癌细胞标记、固定、染色或者其他处理步骤，操作简便；细胞密度和胞外基质浓度等实验条件快速优化，大大节省时间；非侵入方法，检测后的细胞均可用于后续的实验分析。

摘要： 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种山蜡梅叶片在制备抑制食管癌细胞EC109细胞增殖药物中的应用及山蜡梅叶片的制备方法。所述山蜡梅叶片由山蜡梅叶1500g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得槲皮素和山柰素含量有很大提高。

摘要： 本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种食管癌细胞系中功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法及其应用。本发明通过分别转染目的基因sgRNA与CRISPR/Cas9载体同源重组后的质粒和CRISPR/Cas9的空载，然后利用流式细胞仪分选细胞，接种至六孔板中。余下的细胞裂解获取DNA，PCR后作琼脂糖凝胶鉴定验证。分选的细胞在细胞培养箱中培养2周后，终止培养，以4％多聚甲醛固定后，再经结晶紫染色。此时可肉眼判断每组细胞的克隆形成数目，克隆形成率可准确反映细胞的增殖能力和群体依赖性。根据克隆形成结果即可快速判断食管癌功能基因敲除后的增殖表型，本发明具有高效率、高精确和高通量等优势。

摘要： 本实用新型公开了一种用于提取食管癌细胞的样本破碎过滤装置。本实用新型包括外壳，所述外壳一侧设置有取料门，所述外壳顶端安装有箱盖，所述箱盖具有两个并形成轴对称，所述箱盖底端安装有固定轴承，所述固定轴承固定安装有转筒，所述转筒外侧固定安装有收集桶，所述收集桶底端插接有收集瓶，所述收集瓶顶端安装有插盖，所述转筒内部镶嵌安装有内筒，所述转筒底端焊接有第一转杆，所述第一转杆连接有第二转杆，所述第二转杆套接安装有固定转轴，所述固定转轴两端固定安装有固定杆，所述第二转杆另一端连接有第三转杆，所述第三转杆顶端固定连接有电机。本实用新型具有方便收集，防止外界污染，破碎与收集效率更高，以及搅拌筒清洗方便的优点。