斑蝥素阻断核转录因子κB信号通路抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移

摘要

目的:探讨斑蝥素对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移的影响,以及从核转录因子 κB(NF-κB)信号通路角度探讨其机制.方法:组织块贴壁法获取SD大鼠原代VSMCs,以1 mg/L的脂多糖诱导VSMCs增殖和迁移.实验分4组:对照组、1 mg/L脂多糖刺激组、脂多糖刺激后加用5μmol/L斑蝥素组和脂多糖刺激后加用10μmol/L斑蝥素组.观察不同浓度斑蝥素对VSMCs增殖和迁移的影响及从NF-κB信号通路角度探讨其机制.结果:细胞毒性及增殖检测实验显示,斑蝥素浓度在10μmol/L内细胞活性不受影响,脂多糖使用浓度为1 mg/L时VSMCs增殖能力显著提高,但随着脂多糖浓度的进一步提高其增殖能力增速减慢.流式细胞仪检测结果显示,脂多糖可促进VSMCs由S期向G2期转化,而斑蝥素可明显抑制脂多糖的上述作用(P<0.05).Transwell结果显示,脂多糖可显著诱导细胞迁移(P<0.01),而斑蝥素可呈浓度依赖性抑制脂多糖诱导的细胞迁移(P<0.01).蛋白免疫印迹法检测显示,脂多糖显著增加磷酸化NF-κB p65水平,同时明显抑制NF-κB抑制蛋白(IκB-α)的表达,而斑蝥素呈浓度依赖性抑制脂多糖的上述作用(P<0.05).实时荧光定量聚合酶链式反应法和酶联免疫吸附测定结果均显示,脂多糖显著增加促炎因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6和单核细胞趋化蛋白-1的表达(P<0.05),而斑蝥素可呈浓度依赖性抑制其表达(P<0.05).结论:斑蝥素对脂多糖诱导的VSMCs的增殖和迁移具有显著抑制作用,其机制与抑制NF-κB通路并减轻炎症反应有关.