不同方法分离的成人睾丸支持细胞与胰岛共移植的效果对比

摘要

目的比较成人睾丸支持细胞（Sertoli）不同分离方法的效果,建立成人Sertoli细胞的简便高效的分离方法。方法将质量相等的睾丸组织按照不同分离方法随机分为三组：A组采用胰蛋白酶、DNA酶、胶原酶和透明质酸酶一步消化法;B组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,胶原酶和透明质酸酶第二步消化;C组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,透明质酸酶第二步消化,胶原酶第三步消化;D组为对照组。采用形态学观察和免疫组化鉴定Sertoli细胞;MTT法和流式细胞仪法测定三组Sertoli细胞的活性和纯度;比较三组Sertoli细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠的效果。结果分离获得的细胞经形态学和免疫组化鉴定,具有Sertoli细胞的特征,A、B、C三组Sertoli细胞的纯度分别为（85.17±1.8）﹪、（92.33±2.5）﹪和（93.12±2.6）﹪,B组和C组的Sertoli细胞纯度显著高于A组（P〈0.05）。B组Sertoli细胞活性于培养14d时达到峰值,此后缓慢下降。B组Sertoli细胞活性显著高于A组和C组（P〈0.05）,且B组Sertoli细胞与胰岛共移植术后胰岛移植物存活时间显著高于A、C、D组（P〈0.05）。结论采用两步消化的方法能够获得纯度和活性较高的Sertoli细胞,其与胰岛共移植能够显著延长移植物存活。