一种高温酸性α-淀粉酶基因的高效表达和表达产物分析

摘要

一种高温酸性α-淀粉酶基因经密码子优化后在巴斯德毕赤酵母中得到了高效表达，表达的重组α-淀粉酶rBD5063具有α-淀粉酶的活性，表达量达到60mg／L。对rBD5063进行了纯化并对多组分的表达产物进行了研究。rBD5063作用最适pH值为5．0，在pH3．5～10．0范围内酶活性保留50％以上，最适温度在105～110℃之间，在90℃下酶活性半衰期约30min。低浓度Ca2＋对激活rBD5063活性和维持稳定性是必需的，高浓度对活性会产生轻微抑制作用，Mg2＋、SDS和Trition X-100都能够部分抑制rBD5063活性，Cu2＋和EDTA严重抑制rBD5063活性。表达产物水解可溶性淀粉主要产物是单糖和低聚寡糖。表达产物包括分子量分别是62、56、44kD的3种活性组分，在通常情况下主要以大分子量活性多聚体的形式存在。重组α-淀粉酶rBD5063不存在N-连接的糖基化，但是存在O-连接的糖基化现象，O-连接对rBD5063的热稳定性和最适温度没有显著影响。