人canstatin cDNA分泌型真核表达载体的表达及生物学作用研究

摘要

目的 将人canstatin Cdna分泌型真核表达载体pSecTag2B/canstatin稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞并获得稳定表达canstatin蛋白产物的细胞株.再进一步研究表达产物的生物学作用.方法 将人canstatin Cdna的重组1质粒pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞,应用RT-PCR、western-blotting法检测表达产物,再用多种方法进一步研究canstatin的生物学作用.结果 成功的将pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞并鉴定出上清液中有目的蛋白的表达.该细胞培养上清液能抑制鸡胚绒毛尿囊膜中微血管的生成,抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)的生长并诱导其凋亡.结论 ①成功的将pSecTag2B/canstatin稳定转染CHO-K1细胞并获得能稳定表达canstatin蛋白产物的细胞株;②证实含canstatin蛋白产物的细胞培养上清液具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的活性并可在体外抑制HUVEC-12的生长和诱导其凋亡.