胡桃醌对大鼠血清中与脑组织损伤相关生物标志物的影响

摘要

目的:考察胡桃醌对大鼠脑组织的影响及其与脑组织损伤相关生物标志物的关系。方法:将40只大鼠分为空白组和胡桃醌高、中、低剂量组(34.832、17.416、8.708 mg/kg),每组10只,每天灌胃给药1次,连续给药4周。末次给药后,考察各组大鼠的一般行为学、脑指数及脑组织病理形态。采用超高效液相色谱-多反应检测质谱(UPLC-MRM-MS)法检测各组大鼠血清中左旋多巴(L-Dopa)、L-酪氨酸(L-Tyr)、L-色氨酸(L-Trp)的含量。色谱条件为色谱柱Waters Acquity UPLC BEH C18,流动相为乙酸铵水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,进样量为5μL,柱温为30℃;质谱条件为电喷雾离子源,正离子模式下检测,毛细管电压为3500 V,去溶剂气流量为650 L/h,去溶剂化温度为350℃,离子源温度为110℃。结果:与空白组比较,胡桃醌各剂量组大鼠出现倦怠、四肢无力的行为;脑组织可见大、小脑皮质内血管充血,锥体细胞层部分神经元固缩,核深染,形态不规则,边界不清晰等病理性改变;胡桃醌高剂量组脑指数显著增加(P<0.05)。建立的UPLC-MRM-MS法专属性良好,L-Dopa、L-Tyr、L-Trp的检测质量浓度线性范围分别为31.25~32000、31.25~32000、15.625~16000 ng/mL(r=0.9991~0.9999),检测限分别为6.250、5.625、3.125 ng/mL,定量限分别为15.625、18.75、10.00 ng/mL,精密度、准确度、稳定性(24 h)试验RSD均小于2.6%(n=6),基质效应为95.1%~100.1%(RSD均未超过3.25%,n=3)。动物实验结果显示,与空白组比较,胡桃醌中、高剂量组L-Dopa含量显著升高(P<0.01);胡桃醌低、中、高剂量组L-Tyr含量显著升高,L-Trp含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:胡桃醌对大鼠的行为学、脑指数、脑组织形态均有明显影响,可能通过升高血清中L-Dopa、L-Tyr的含量,降低L-Trp的含量影响大鼠的脑组织功能。