高效液相色谱-高分辨四极杆-飞行时间-质谱法测定中成药中非法添加物二乙氨基前他达拉非

摘要

目的建立检测中成药中非法添加物二乙氨基前他达拉非的高效液相色谱-高分辨四极杆-飞行时间-质谱(HPLC-QTOF-MS)法,并根据他达拉非类化合物的特征碎片离子实现非目标化合物的筛查。方法色谱柱为Agilent EC C18柱(100 mm×3.0 mm,2.7μm),流动相为乙腈-0.1%乙酸溶液(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温为35℃,进样量为1μL;采用Q-TOF-MS作检测器,电喷雾电离(ESI),正离子模式,根据保留时间、精确相对分子质量和二级碎片比进行定性分析;由提取离子流图峰面积与质量浓度关系进行定量分析;基于精确相对分子质量的二级质谱图推测裂解规律;通过提取质荷比(m/z)为135.0441碎片离子的色谱峰识别他达拉非类化合物。结果归纳了常见磷酸二酯酶Ⅴ型抑制剂(PDE5i)他达拉非类化合物的ESI质谱裂解规律。二乙氨基前他达拉非质量浓度在0.11~5.26μg/mL范围与峰面积线性关系良好(r=0.9970,n=5);检测限为0.021μg/mL,定量限为0.053μg/mL;稳定性、重复性、精密度试验结果的RSD均小于4.60%;平均加样回收率大于97.80%(n=9)。1批样品中检出二乙氨基前他达拉非,含量为3.58 mg/g。结论该方法准确、可靠,适用于二乙氨基前他达拉非的定性定量分析,通过特征碎片离子可以实现他达拉非类化合物的快速识别。