人支气管上皮癌变各阶段组织蛋白质双向电泳图谱的差异分析

摘要

目的:探讨肺鳞癌癌前病变恶性转化的机制. 方法:应用脱氧胆酸-三氯醋酸(deoxycholate-trichloroaetic acid,DOC-TCA)法提纯支气管上皮癌变各阶段组织总蛋白质,采用固相pH梯度(immobilized pH gradient, IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)分离总蛋白质,凝胶经银染显色后,ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点. 结果:①重复性检测表明同一例鳞状上皮化生组织的三块凝胶的平均点数为1 216 ±75 ,平均匹配点数为1 082±67,匹配率达89.3% , 且3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向的偏差是(0.865±0.247)mm ,在SDS-PAGE方向上的偏差为(0.971±0.104)mm,由此获得了分辨率较高、重复性较好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱,正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织凝胶的平均蛋白质点数依次为1 190±36、1 227±39、1 272±41、1 326±52;②比较分析人支气管正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织各7例的双向凝胶电泳图谱,发现癌变前一阶段与后一阶段两两间的差异蛋白点分别为 34±16、41±15、46±13;③对24个差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出一些与细胞增生、分化、细胞周期调控、信号传导等有关的蛋白质. 结论:本研究建立了分辨率高、重复性较好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱,识别并鉴定了一些与支气管上皮癌变相关的差异表达的蛋白质,为进一步探讨肺鳞癌癌变机制,筛选肺鳞癌的特异性分子标志物奠定了初步基础.