三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用

摘要

背景与目的:shRNA技术是近来发展的热点技术之一,但普遍采用的单位点shRNA干扰载体效果并不理想.本研究探讨三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用.方法:构建外源基因DsRed全长载体转染HEK293细胞.针对报告基因DsRed设计4个干扰载体,一个含有3段shRNA,另外3个分别含有此3段中1段shRNA.转染293/DsRed,荧光显微镜观察基因DsRed.应用实时定量PCR(Real-time PCR)和流式细胞仪(FACS)检测4个载体对DsRed基因在mRNA及蛋白水平干扰效应.结果:4个载体对靶基因DsRed在mRNA及蛋白水平均有干扰效应,且含有3段shRNA载体对DsRed基因干扰效率为(89±16)%,显著高于3个只含有1段shRNA载体[(50±23)%,(52±15)%,(55±27)%],差异有显著性(P<0.05).结论:三位点shRNA干扰载体可以提高对靶基因的干扰效率.