小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需siRNA的筛选

摘要

目的 筛选出小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需的高效siRNA.方法 采用两步胶原酶灌注法分离小鼠原代肝细胞,放入25 cm2胶原包被瓶中(1×106个/瓶),均分为5组:对照组(C组)、阴性对照组(NC组)、siR-996组、siR-1381组、siR-1519组.采用HiPerFect转染试剂将各组对应的siRNA序列转入小鼠原代肝细胞,24 h后提取RNA和蛋白,通过Real-time PCR检测各组PTEN mRNA表达,通过Western blot检测各组PTEN蛋白含量.结果 siR-996组、siR-1381组和siR-1519组的PTEN蛋白含量低于NC组,差异有统计学意义(P＜0.01),siR-996组、siR-1381组和siR-1519组的PTEN mRNA水平低于NC组,差异有统计学意义(P＜0.01).siR-996组的PTEN蛋白含量及PTEN mRNA水平最低,其PTEN蛋白含量及PTEN mRNA水平的沉默效率高于siR-1381组和siR-1519组.结论 siR-996是小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需的高效siRNA.