氯化血红素对大鼠肺微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

摘要

目的 探讨氯化血红素(hemin)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)氧化应激损伤的保护作用.方法 ①应用SD雄性大鼠的肺组织,进行大鼠PMVECs的原代培养并传代培养;通过倒置显微镜观察其形态,Ⅷ因子相关抗原免疫荧光鉴定.②应用H2O2构建PMVECs氧化应激损伤模型,并用hemin与H2O2共同孵育PMVECs.③采用MTT比色法检测各组细胞活力变化,用比色法检测内皮细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,Western-blot检测各组内皮细胞微管相关蛋白1轻链3(LC-3)含量.结果 ①体外培养的大鼠PMVECs呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列,免疫荧光检测FITC标记的Ⅷ相关抗体呈阳性,阳性率90％以上,成功建立了PMVECs的原代培养方法；②H2O2使内皮细胞活力下降,且呈剂量依赖性,200 μmol/L H2O2内皮细胞活力下降50％左右；③H2O2组LDH含量均高于hemin组及正常对照组(P＜0.05),hemin组LC-3的表达显著低于H2O2组.结论 低浓度hemin对H2O2诱导的PMVECs氧化应激损伤有保护作用,这种作用可能与hemin抑制H2O2诱导内皮细胞过度自噬有关.