包涵体蛋白3种纯化方法的比较

摘要

目的 比较3种纯化方法对表达的肠道病毒71型(EV71)VP1区包涵体蛋白的纯化效果.方法 分别用差速离心法、固定化金属离子亲和层析(IMAC)及不同浓度饱和硫酸氨沉淀法3种包涵体蛋白纯化法对原核表达EV71 VP1包涵体蛋白进行纯化,蛋白垂直(SDS-PAGE)电泳检测蛋白纯化效果.结果 差速离心法可以进行大批量表达蛋白纯化,纯化效果较好,但存在蛋白损失较多,且纯化蛋白不能反复冻融的问题.IMAC柱纯化获得的蛋白纯度较高,且蛋白性状稳定,但仍存在纯化蛋白量较少的问题.饱和硫酸氨沉淀纯化法无法获得纯度较高的包涵体蛋白.结论 差速离心法可用于大批量蛋白纯化,纯化蛋白应避免反复冻融,可小量分装冻存后备用.IMAC柱纯化可获得纯度较高且性状相对稳定的纯化蛋白,其在相应抗体检测方法学的建立及疫苗制备方面均有广泛用途.饱和硫酸氨法只适用于表达蛋白的初步浓缩纯化.