布鲁菌OMP10包涵体蛋白的纯化及其抗原性的研究

摘要

用设计的1对特异性引物对羊布鲁菌16M总DNA进行外膜蛋白基因omp10的PCR扩增,得到了一个片段大小为330bp的目的基因(去掉17个氨基酸编码的信号肽),测序证实它与国外报道的羊布鲁菌omp10基因完全一致。将其克隆到表达载体PET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析,表明重组表达载体构建成功。将此重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,该基因以包涵体的形式在大肠杆菌中表达,经过包涵体的变性、复性和亲和层析纯化,成功获得大小为14.2ku的融合蛋白,与理论推测的蛋白分子质量一致;Western-blot和间接ELISA试验证明,纯化之后的OMP10重组蛋白可以被布鲁菌阳性血清识别。