磷脂酰丝氨酸外翻与结直肠癌细胞环磷酰胺耐药的相关性

摘要

目的建立环磷酰胺诱导的结直肠癌耐药细胞株HCT 116、HT-29,并探讨磷脂酰丝氨酸外翻与结直肠癌细胞环磷酰胺耐药的相关性。方法用流式细胞仪检测环磷酰胺耐药患者和非耐药患者磷脂酰丝氨酸外翻的表达,实时荧光定量PCR检测耐药相关基因的表达。采用CCK-8测定环磷酰胺的半数抑制浓度值,并以此为筛选浓度,在体外间歇诱导下建立环磷酰胺诱导的耐药细胞株模型。实时PCR检测4种多药耐药基因MRP、MDR1、Topo II、LRP在耐药细胞和非耐药细胞中的表达;蛋白质免疫印迹法检测MDR1蛋白的表达。流式细胞仪检测结直肠癌环磷酰胺耐药细胞和非耐药细胞磷脂酰丝氨酸外翻表达阳性率。结果环磷酰胺耐药患者相对非耐药患者的组织的磷脂酰丝氨酸外翻表达率相对较高,且耐药相关基因的表达增高。筛选出的HCT116、HT-29耐药组细胞与非耐药细胞比较,其细胞活性显著提高（P＜0.05）。实时PCR和蛋白质免疫印迹法检测耐药相关MDR1蛋白在HCT116、HT-29耐药细胞株表达增高,差异有统计学意义（P＜0.05）。流式细胞检测结直肠癌HCT116、HT-29耐药细胞相对非耐药细胞磷脂酰丝氨酸外翻的表达增高。结论结直肠癌耐药组织或耐药细胞中耐药相关基因表达水平高于非耐药组织或非耐药细胞,且磷脂酰丝氨酸外翻的表达与耐药相关基因的表达成正比,对评估CRC环磷酰胺耐药具有一定参考意义。