精子质膜磷脂酰丝氨酸外翻、线粒体膜电位和质膜磷脂紊乱变化研究

摘要

精子能够成功与卵子受精需要具备完整的质膜和良好的线粒体膜电位，精子的新陈代谢、活力的维持、获能、顶体反应以及精卵结合等都与精子质膜的完整性和线粒体膜电位密切相关。因此，精子质膜完整性和精子线粒体膜电位有可能是评估精液质量的重要指标，值得进一步研究。 本研究一方面采用Rh123/PI和JC-1染色法对生育男性和不育患者精子的线粒体膜电位进行检测，评价了Rhl23/P工双染法和JC-1染色法在评价精液质量方面的可行性。结果表明，Rhl23/PI染色和JC-1染色结果和精子活力、“a”级精子、“a+b”级精子存在相关性。另一方面，本研究还对精子质膜PS外翻和线粒体膜电位之间的关系进行探讨，发现精子线粒体膜电位丧失百分率和质膜PS外翻百分率存在相关性。 另一方面，我们对生育男性的精液标本进行不连续密度梯度离心后，分别对精液原液、45％层低活力精子和90％层高活力精子在含O.3％人血清白蛋白(HSA)和3.0％HSA的BWW培养液里进行孵育，检测不同时间点质膜PS外翻、线粒体膜电位和质膜紊乱情况。结果表明， 45％层中低活力精子PS外翻和线粒体膜电位丧失百分率高于原液，而90％则比原液低；12 h内体外不同条件下孵育，活精子PS外翻百分率、线粒体膜电位丧失百分率和质膜磷脂紊乱均不见明显变化；而坏死精子百分率在12 h时明显增加，说明体外精子在正常的孵育过程中，并不会自发凋亡，只会以坏死形式进入最终结局。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 流式细胞术检测精子线粒体膜电位及其与精液参数的相关性

1.1材料与方法

1.1.1主要试剂

1.1.2常用试剂配制方法

1.1.3主要实验仪器

1.1.4精液标本选择

1.1.5精子细胞Rh123/PI染色

1.1.6精子细胞JC-1检测

1.1.7 FCM检测

1.1.8统计学分析

1.2结果

1.2.1 Rh123/PI双染后FCM分析结果

1.2.2 JC-1染色后FCM分析结果

1.2.3 CASA分析的精子活动率与FCM分析的线粒体膜电位良好精子百分率比较

1.2.4 FCM分析结果与精液常规参数相关性比较

1.3讨论

附图表

第二部分精子质膜磷脂酰丝氨酸外翻与线粒体膜电位关系的研究

2.1材料与方法

2.1.1主要试剂

2.1.2常用试剂的配制方法:同第一部分

2.1.3主要实验仪器

2.1.4精液标本选择

2.1.5 Annexin V/PI染色

2.1.6 Rh123/PI染色

2.1.7 FCM检测

2.1.8荧光显微镜检测

2.1.9统计分析

2.2实验结果

2.2.1 Annexin V/PI双染及Rh123/PI双染后经FCM分析结果 见图2.1、图2.2

2.2.2 Annexin V/PI法统计分析结果 见表2.1

2.2.3 Rh123/PI法统计分析结果 见表2.1

2.2.4两种实验结果之间的比较

2.2.5 Annexin+/PI-精子百分率与Rh123-/PI-精子百分率相关性比较

2.2.6荧光显微镜观察结果

2.3讨论

附图表

第三部分体外精子孵育过程中获能后质膜和线粒体膜电位变化的研究

3.1材料与方法

3.1.1主要试剂

3.1.2常用试剂配制方法

3.1.3主要实验仪器：同第二部分

3.1.4研究资料

3.1.5不连续密度梯度离心

3.1.6精子体外孵育

3.1.7质膜磷脂酰丝氨酸外翻和线粒体膜电位检测 同第二部分

3.1.8质膜紊乱检测

3.1.9统计学分析

3.2实验结果

3.2.1梯度离心后不同层精子PS外翻检测结果

3.2.2梯度离心后不同层精子线粒体膜电位变化

3.2.3体外孵育对不同层精子后质膜紊乱影响

3.3 讨论

附图表

全文小结

参考文献

研究生期间的学术论文发表情况

致谢