异种移植供体猪α-1,3GT基因打靶引导序列获得及其染色体定位

摘要

目的:为阻止异种抗原靶分子的生成,抑制或减轻HAR发生,试图对异种抗原的合成酶α-1,3GT基因进行打靶灭活,以产生α-1,3GT表型缺乏且具有抗HAR反应能力的异种供体(猪).方法:以α-1,3GT基因的cDNA片段为探针,采用噬茵斑原位杂交结合PCR技术筛选猪gDNA文库,经酶切、Southern杂交、测序鉴定所得片段,并采用荧光原位杂交定位.结果:获7个片段,均在8kb以上,且包含第三内含子,其中3个片段测序证实包括第三、第四外显子;荧光原位杂交证实该基因位于猪染色体1q2.10～q2.11.结论:研究表明所得片段可作为该基因打靶引导序列,染色体定位明确了基因打靶位点,PCR技术可以用于快速筛选gDNA文库.