毕赤酵母表达杀菌/渗透性增强蛋白N端片段

摘要

目的探讨在毕赤酵母中进行杀菌/渗透性增强蛋白N端片段的分泌表达.方法从质粒pUCm-BPI上PCR扩增得到编码BPI氨基端196个氨基酸的基因片段(BPI588).将该基因克隆到酵母表达载体Ppic9K上,使其准确融合于α交配因子分泌信号之后,电击转化毕赤酵母宿主菌GS115/His-.对酵母重组子的基因组DNA作PCR和总RNA作RT-PCR分析.筛选出的转化子用甲醇作诱导物在29℃进行诱导后,分泌到培养基中的表达产物用于革兰氏阴性细菌E.coli JM109的抑菌实验.结果BPI588基因已整合到毕赤酵母染色体基因组中,并有转录产物mRNA的存在,表达产物能够抑制革兰氏阴性细菌的生长.结论利用毕赤酵母进行杀菌/渗透性增强蛋白N端片段的分泌表达是可行的.