瘦素增加肥胖哮喘性大鼠气道平滑肌细胞糖皮质激素受体β的表达

摘要

目的 观察哮喘性大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC)在有无瘦素(Leptin,LP)干预的情况下,其糖皮质激素受体β(glucocorticoid receptor,GR-β)表达的变化,探讨肥胖哮喘易发生激素抵抗的可能机制.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为正常体质量组和肥胖组,正常体质量组进一步分为正常体质量对照组(A组)和正常体质量哮喘组(B组),肥胖组进一步分为肥胖对照组(C组)和肥胖哮喘组(D 组).正常体质量组大鼠给予基础饲料,肥胖组大鼠给予高能饲料以复制肥胖模型,鸡卵蛋白(OVA)多次腹腔注射和反复雾化激发以复制哮喘模型.末次激发后24 h处死大鼠,体外原代培养大鼠ASMC.RT-PCR法分别测定A、B、C、D组细胞瘦素受体(OB-R)mRNA的表达;分别用生理盐水(NS)和LP(50 ng/ml)干预A、B、C、D组细胞48 h,Western blotting法检测各组GR-β蛋白表达.结果 RT-PCR电泳结果示在500 bp处有明显条带,其大小与OB-R目的基因片段大小相符,说明AMSC上有OB-R表达,且B组(0.389±0.046)、C 组(0.404±0.037)OB-R表达量均较A组(0.305±0.043)明显增高(均P＜0.05),均较D组(0.552±0.066)明显降低(均P ＜0.05),而B、C两组OB-R表达量之间差异无统计学意义(P＞005).Western blotting检测显示,在NS干预的情况下,B、C两组细胞GR-β蛋白表达量分别为(0.40±0.02)和(0.37±0.05),均较A组蛋白表达量(0.17±0.03)明显增加(均P＜0.05),均较D组蛋白表达量(0.48±0.02)明显减弱(均P＜0.05),而B、C两组蛋白表达量之间差异无统计学意义(P＞0.05).在LP干预的情况下,各组细胞GR-β蛋白表达量均分别较相应的NS干预组的蛋白表达量明显增加(F=377.04,均P＜0.01),且B、C两组细胞GR-β蛋白表达量分别为(0.72±0.03)和(0.71±0.06),仍较A组蛋白表达量(0.42±0.04)明显增加(均P＜0.05),较D组蛋白表达量(0.82±0.05)明显减弱(均P＜0.05),而B、C两组蛋白表达量之间差异仍无统计学意义(P＞0.05).结论 LP可能通过OB-R作用于大鼠ASMC,并能够增加肥胖哮喘大鼠ASMC GR-β的表达,这可能是肥胖哮喘易发生激素抵抗的作用机制之一.